203983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfipestis elleni élő vakcina előállítására
1 HU 203 983 B 2 Immunizálási kísérletek A) Broilerek immunizálása Napos-néhány hetes állatok első immunizálása az NDV-6/10 törzzsel különösen ajánlott, mivel oltási reakciót nem okoz. A szervezetbe bejuttatott élő vakcinatörzs elszaporodása az immunitás kifejlődésének előfeltétele. Ezt a szaporodást azonban a tojásszikből származó matemális ellenanyagok a csibék szervezetében gátolják. Különösen akkor, ha a matemális ellenanyagok szintje az immunizálás idejében magas. E gátló hatás csökkentésére az alábbi lehetőségek kínálkoznak. a) Ha az első immunizálást 2-3 hetes korban végezzük, az akkor már csökkent ellenanyagszint miatt a gátló hatás kevésbé érvényesül. Az életkor növekedésével azonban a csibék fogékonysága nő a temiészetes fertőződés iránt, és ha ez bekövetkezik, súlyos járvány robbanhat ki. b) Ha a vímst a szem kötőhártyájára, vagy az orr nyálkahártyájára cseppentjük, a matemális ellenanyagok a bemeneti kapuban a vírus szaporodását nem gátolják jelentős mértékben. Ez az immunizálási mód azonban nagyon munka- és időigényes, nagy kapacitású keltetőkben alkalmazása ezért nagyon körülményes. c) A nagy cseppecskékből (30-100 nm) álló sprayben lévő vakcina vírus jelentős része szintén a kötőhártyára, vagy az on nyálkahártyájára jut, s ez nagyon előnyös. A víruspartikulák egy részét azonban az állatok belélegzik, s ez a vakcinatörzs megbetegítő képességétől függően már oltási reakciókat okozhat. Ettől az NDV-6/10 törzs esetén nem kell tartani. d) A kötőhártyára vagy az on nyálkahártyájára juttatott vírus mellett egyidejűleg befecskendezett 0,1- 0,2 ml-nyi inaktivált vakcina az immunitás tartósságát növeli, de az eljárás nagyon munkaigényes. e) A kiváltható immunitás szempontjából legkedvezőbb a vakcinavírust tartalmazó folyadék aprócseppes (>nm) porlasztása, mert az aeroszolból a víms a kötőhártyán és ormyálkahártyán kívül a légcsőbe és a tüdőbe is eljut. Fiatal korban az eddigi vakcinatörzsek ily módon alkalmazva súlyos oltási reakciót okozhatnak. Az NDV-6/10 törzs egyik legnagyobb előnye, hogy a 2-3 hetes kor elérése előtt (akár a keltetőben is) alkalmazható nemcsak spray, hanem aeroszol formájában is. A fenti megállapításokat széleskörű intézeti és üzemi kísérleteink alapján tettük. A LaSota (Phylavac, PHYLAXIA) vímst 106-2 és az NDV-6/10 vímst 106-5 EID50 mennyiségben ivóvízben 3 hetes csirkéknek adtuk. A vakcinálást követően az 1 millió halálos adagi! felülfertőzést a két vakcináit csoport csirkéi az alábbi 9c-ban élték túl: Phylavac (kontroll) NDV-6/10 3 hél múlva 40% 100% 6 hét múlva 18% 93% Megismételt összehasonlító kísérleteinkben megvizsgáltuk, hogy a napos korban csak kötőhártyára cseppentett NDV-6/10 törzs (50 000 EID50) által kiváltott védelem különbözik-e az egyidejűleg 0,1- 0,2 ml inaktivált vakcinát (Phylapest, PHYLAXIA) is kapott csirkék immunitásától. Hasonló elrendezésben beállítottuk ezt a kísérletet NDV-6/10 törzzsel spray formájában vakcináit csoportokkal is. Négyhetes korban valamennyi csoport csibéi túlélték a mesterséges fertőzést. A 6-7 hetes korban végzett mesterséges fertőzések során az inaktivált vakcinát is kapott, kötőhártyára cseppentéssel immunizált és felülfertőzött 10 állat 100%-os védelmet mutatott. Miután meggyőződtünk az NDV-6/10 törzs ártalmatlanságáról és hatékonyságáról itatás, kötőhártyára cseppentés és spray formájában alkalmazva, megkezdtük a víms aeroszol formájában való kipróbálását. Ezt Tamási Géza és munkatársai által szabadalmazta MASTERDROP (MD-2500) generátorral, (gyártó:. atentszolg. Kisszövetkezet), s az ugyancsak szabadalmazott aeroszol-stabilizálószer (DROY'S DROPS) (gyártó: Patentszolg. Kisszövetkezet) felhasználásával végeztük. E készülék 7 nm-nél kisebb cseppecskéket juttat a légtérbe, s azok ott 25-30 percig lebegnek. A 107-3 EIC50/m3 mennyiségben kijuttatott vímst a légtérben tartózkodó csibék 30 percig lélegzik be. A továbbiakban az NDV-6/10 aeroszolt ilyen koncentrációban alkalmaztuk. Az első kísérletben 47 napos, baromfipestis ellenanyagtól mentes 45 csirkét csak NDV-6/10 jelű vímst tartalmazó aeroszollal immunizáltunk, (1 ml 109,08 EID5()/ml NDV-6/10 víms 500 ml vízzel kiporlasztva), egy másik 45 csirkéből álló csoport pedig egyidejűleg NDV-6/10 és Bronchovac I. (Phylaxia gyártmány) vímst is tartalmazó aeroszolt (1 ml 106-84 EID50/ml Bronchovac I. vakcina 500 ml vízben kiporlasztva) lélegzett be. A vakcinálást követő 3 hét múlva a csak NDV-6/10 vímst belélegzett csoport csibéinek vérsavója 1:27,8, míg a mindkét vímst belélegző csoport 1:33,8 geometriai átlagban tartalmazott baromfipestis elleni ellenanyagot. (A kimutatást haemagglutináció-gátlási próbával végeztük, D. J. Alexander, id. mű alapján). A fertőzést követő 40. napon virulens baromfipestis-vímssal végzett feliilfertőzéskor a 90 állatból csak 1 hullott el (99%-os védelem), az is a csak baromfipestissel immunizált csoportból. E kedvező kísérletek alapján végeztük a nagyüzemi csoportok vakcinálását napostól 10 naposig terjedő életkorban. Az eddig közel 80 000 broilerre vonatkozó kísérleteinkben azt láttuk, hogy a matemális ellenanyagot tartalmazó immunizált csibék vérsavójából a 30. nap körül 3,4-9,4 mértani átlag titerben voltak baromfipestis elleni ellenanyagok kimutathatók. A bőrük alá fecskendezett 1 millió halálos adag virulens vírussal szemben 98-100%-os védelmet mutattak. Két olyan csoportban, amelyekben egyidejűleg fertőző bronchitis víms H120 törzsből készült vakcinát (Intervet, Hollandia) is tartalmazó aeroszollal, a gyártó által javasolt dózissal immunizáltunk, a védelem az egyik csoportban 100, a másikban 929é-os volt. Az utóbbi csoport csibéi az immunizálást követő 50 nap múlva 75%-ban álltak ellen a mesterséges felülfertőzésnek. A többi 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
