203841. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikoplazma-vakcina előállítására
1 HU 203 841 B 2 A találmány tárgya eljárás mikoplazma-vakcina előállítására. A Mycoplasma, és különösen a M. gallisepticum olyan törzs, amely különösen a baromfiakra nézve fertőző. A gazdasági szempontból fontos szárnyasok ezzel a baktériummal történő fertőződése komoly gazdaságiveszteségeket okoz. A M. gallisepticum által okozott betegség csirkék esetén a krónikus légzőszervi betegség, a pulykák esetén pedig a fertőző sinusitis. AM. gallisepticum által okozott fertőzést gyakran kíséri olyan fertőzés, amelyet légzőszervi vírusok és Escherichia coli okoznak. A M gallisepticum fertőzést bizonyos antibiotikumokkal, mint például eritromicinnel, sztreptomicinnel, Idór-tetraciklinnel, tilozinnal vagy magnamicinnal le lehet küzdeni, ezeket rendszerint a takarmányhoz keverik, a baktériumok azonban rezisztenciát fejlesztenek Id ezekkel az anyagokkal szemben, ennek eredményeképpen a betegségek leküzdése egyre nehezebbé válik. Ismeretesek vakcinák a baromfiak M. gallisepticum fertőzése elleni immunológiai védelmére. Az inaktivált M. gallisepticum baktériumot változó laszt váltanak ki, különösen akkor, ha olaj-emulziós adjuvánssal együtt alkalmazzák, ezek a vakcinák azonban a ferőzés ellennem védenek [H. W. Yodder Jr, S.R. Hopkins, Avian Discares 29(2), 322-334 (1985)]. Az Amerikai Egyesült Államok néhány államában, különösen az ún. „tojástermelő farmokon” a vakcinálást gyengített, élő M gallisepticum F-törzzsel végzik. Ezt a törzset permetezéses módszerrel adagolják, és mérsékelt védelmet nyújt légzsákgyulladás ellen, a tojástermelést csökkenti a még elfogadható szintig [M.Y. Lisa, S.H. Kleren, Avian Discares, 28(1), 88-99 (1989)]. Az ismert inaktivált vakcinák hátrányai a következők. Minden állatot egyedüeg kell injektálni. A vakcina nagyon drágá. Az állatok a fertőzés ellen nincsenek védve, azaz a fertőzés után továbbra is a virulens mikoplazma hordozói maradnak. A meglevő élő vakcinák sem problémamentesek. Bár az F-törzs eléggé avirulens csirkék esetén, pulykákra nézve azonban nagyon patogén. Emellett vakcinálás után a csirkék a vakcinatörzs hordozói maradnak, ami tehát a kórokozó elterjedését hosszú időn keresztül biztosítja. Kísérleteink során kidolgoztunk egy olyan M. gallisepticum vakcinát, amely a fent említett hátrányokkal nem rendelkezik. A találmány szerinti eljárással előállított mikoplazma-vakcinára jellemző, hogy olyan M. gallisepticum Intervet 6/85 törzsből készül Az Intervet 6/85 törzs egy új M. gallisepticum törzs, amely egy olyan mutáns, amelyet az ismert S6 törzs (ATCC 15302) többszöri in vitro passzázsával kaptunk. Az 1. ábrán bemutatjuk egymás mellett az S6 törzs és az Intervet 6/85 jelű törzs genomiális DNS-énelc, illetve a XDNS-nek a BamHI, PstI, BgllII és Hindin restrikciós endonukleázokkal készült mintáját Az új, Intervet 6/85 jelű M. gallisepticum törzset 1987. július 7-én deoponáltuk a párizsi Pasteur Intézetben (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) 1-673 számon. Az említett Intervet 6/85 törzsből készült vakcinák előállítása tehát a találmány tárgykörébe tartoznak. Az Intervet 6/85 törzs számos előnyős tulajdonsággal rendelkezik az ismert M. gallisepticum törzsekkel szemben, amelyek különösen alkalmassá teszik vakcinaként való alkalmazásra, és amelyek megkülönböztetik az ismert M. gallisepticum törzsekhez képest: a) csirkékre nézve számos nem virulens, klinikai tünetet nem okoz; légzsákgyulladás gyakorlatilag nem fordul elő; b) pulykákra nézve nem virulens; c) 4 héttel az adagolás után csak elhanyagolható számú állatban található meg, míg az F-törzset az állatoknak majdnem 100%-a hosszú időn keresztül üríti; d) az endonukleáz restrikciós mintáját az 1. ábra mutatja. A találmány szerinti vakcinát baromfiaknak előnyösen élő vakcina formájában adagoljuk, adagolhatjuk azonban inaktivált vakcina formájában is. A mikoplazma-vakcinát a hasonló vakcinákhoz alkalmazott módon adagolhatjuk, a találmány szerinti eljárással előállított vakcina azonban különösen alkalmas aeroszol formájában történő adagoláshoz. A vakcina nagyon finoman eloszlatott aeroszol formájában hozható például a Vineland aeroszol berendezéssel, (gyártó: Root-Lowell Co. USA modellszám: 1026 X Atomist). A találmány szerinti eljárással előállított mikoplazma-vakcina forgalomba hozható például fagyasztvaszárított formában. Ebből vizes folyadék, például csapvíz adagolásával szuszpenzió formájában is forgalomba hozható. Kívánt esetben a vakcina egy vagy több stabilizálószert (például sovány tejet vagy kazein hidrolizátumot) és/vagy egy vagy több antibiotikumot (például ampicillint vagy polimicint) is tartalmazhat. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina különösen alkalmas baromfiak mikoplazma fertőzésének leküzdésére. Különösen alkalmas mikoplazma fertőzés leküzdésére csirkék és pulykák esetén. A vakcinát legjobb a tenyésztési időszakban, előnyösen 8- 15 hetes korban adagolni a tojásrakó időszakban kialakuló védelem érdekében. A vakcinát előnyösen a tenyészidőszakban adagoljuk, mivel a) az enyhe oltási reakció, amely a vakcináláskor kialakulhat, a tojástermelésre nincs kihatással; b) megfelelő védelemre van szükség akkor, amikor az állatok elkezdenek tojni; c) az állatoknak védettelmek kell lenniük, amikor a tenyésztőhelyről a tojásrakó helyre kerülnek, ahol a fertőzések rendszerint bekövetkeznek. A találmány szerinti eljárással előállított vakcinák egyik előnyös tulajdonsága az, hogy csirkékre nézve nagyon alacsony a virulenciá juk. Ezt fehér Leghorn tenyészetekben igazoltuk, ahol a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
