203787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására
1 HU 203 787 B 2 szenet (a Takeda Chemical Industries Ltd., Japán terméke, kromatográfia céljára) tartalmaz és az oszlopot 150 ml desztillált vízzel mossuk. Az eluátumot és a mosóoldatokat egyesítjük, így 1450 ml oldatot kapunk, amelyet 250 ml-re sűrítünk csökkentett nyomáson, 50 ’C hőmérsékleten. A koncentrátumot 5 *C- on egy éjszakán át pihentetjük, így kiválik a 2-keto-L-gulonsav. A kapott kristályokat szűréssel elválasztjuk és kevés hűtött vízzel, 50%-os hideg metanollal és hideg metanollal mossuk. A kapott terméket foszfor-pentoxid felett vákuumban szárítjuk, és így 156 g 2-keto-L-gulonsav-monohidrátot kapunk, amely színtelen kristály. Kitermelés: 81,1%. Olvadáspont- 171 *C (bomlik). Elemanalízis a CsHioCV^O összegképlet alapján: számított C 33,97% H 5,62%. talált C 33,91% H 5,65%. Fajlagos forgatóképesség: [a]if—48* (c-1,0 H2O- ban). 7. példa 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba 20 ml kővetkező összetételű táptalajt teszünk: 2,0% D-glukóz, 3,0 térfogat% megatáptalaj, 1,0% CSL, 0,5% élesztőkivonat, 0,1% pepton, 0,3% ammónium-szulfát és 2,0% CaCOj (Super 1700, Maruo Calcium K. K., Japán terméke) és azt a Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86 törzs mikrobasejtjeivel beoltjuk. Rázókultúrával tenyésztjük 30 *C-on 2 napig. A kapott tenyészetből 2 ml-t egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk, amely 20 ml azonos táptalajt tartalmaz és ugyanolyan módon végezzük a tenyésztést, hogy az oxidációs baktériumból egy második oltótenyészetet nyerjünk. 25 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammóniumszulfát, 0,05% Na2S203*5H20, 0,1% FeS(V7H20, 5% Ca-C03 (Super 1700, a Maruo Calcium K. K., Japán terméke), és 12,5% külön sterilizált L-szorbózt egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 °C-on 20 percig autoklávban kezelünk. A CeCl3«7HjO-t külön sterilizáljuk és különböző mennyiségben az Erlenmeyer-lombikba adjuk, majd azt 1,25 ml fentebb leírt második oltótenyészettel és 0,1 ml, 5. példában ismertetett bekeverendő mikroorganizmus oltótenyészettel beoltjuk. A tenyésztést rázőkultúrával 30 *C-on 3 napig végezzük, a fermentációs oldatban kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét mg/ml-ben az 5. táblázatban tüntetjük fel. 5. táblázat Hozzáadott Keletkezett CeCl3*7H20 (%) 2-keto-L-gulonsav 0 105,3 (78,2%) 0,002 116,3 (86,3%) 0,01 119,7 (88,9%) 0,05 118,2 (87,8%) A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek. 8. példa A TH 14-86 oxidáló baktériumtörzsből a 7. példában leírt módon másodlagos oltótenyészetet készítünk. 25 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammónium-szulfát, 0,05% Na2S203*5H30, 0,1% Fe -SOWH2O, 24% CaCOs (a Wako Pure Chemical Industries, Japán, garantált reagense) és 7,5% előzetesen sterilizált L-szorbózt egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és sterilizálunk. Különböző mennyiségű, külön sterilizált CeCl3»7H:0-t adunk a fermentációs közeget tartalmazó Erlenmeyer-lombikba és 1,25 ml fentebb ismertetett második oltótenyészettel beoltjuk. A tenyésztést rázással 30 *C-on 3 napon keresztül folytatjuk, a fermentációs oldatban kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét mg/ml-ben a 6. táblázatban tüntetjük fel. 6. táblázat Hozzáadott CeCl3*7H20 (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav 0 30,0 (37,1%) 0,00001 61,2 (75,7%) 0,0001 67,1 (83,0%) 0,001 70,7 (874%) 0,01 70,6 (87,4%) 0,1 70,5 (87,2%) A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek. 9. példa A TH14-86-OS oxidáló baktériumtörzsből a 7. példában leírt módon második oltótenyészetet készítünk. Egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba belehelyezünk 20 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammonium-szulfát, 0,05% Na2S203.5H20, 0,1% FeSOWHjO, 5,0% CaC03 (Super 1700), valamint 12,0% külön sterilizált L-szorbózt és a 7. táblázatban feltüntetett nehézségű és fajtájú adalékanyagot, majd az egészet sterilizáljuk. A táptalajt ezután 1 ml fentebb készített második oltótenyészettel beoltjuk és rázótenyésztést végzünk 30 *C-on 2 napig. Az így kapott 2-keto-L- gulonsav mennyiségét nagy teljesítményű folyadékkromatográfíával állapítjuk meg. Az eredményeket a 7. táblázatban tüntetjük fel. Ugyanitt megadjuk az adalékanyag nélkül végzett tenyésztés eredményét is. 7. táblázat Adalék Hozzáadott (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav nincs 0 85,1 (65,8%) LaCWHiO 0,005 105,4(81,5%) NdCl3»6H20 0,005 CeCl3*7H20 0,005 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
