203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 Ser Phe Leu Lys Ser Phe Ser Glu Leu Lys QRS TTY YTZ AAM QRS TTY QRS GAM YTZ AAM Ser Phe Phe Gly Ser Glu Leu Lys Ser Phe QRS TTY TTY GGX QRS GAM YTZ AAM QRS TTY vagy Thr Glu Phe Gly Ser Glu Leu Lys Ser Phe ACX GAM TTY GGX QRS GAM YTZ AAM QRS TTY és D’ jelentése vegyértékvonal vagy az eglin-C tér- jelentése vegyértékvonal vagy az alábbi csoportból váminális aminosavát kódoló nukleotidszekvencia és B’ lasztott megfeleld C-terminális aminosavak His Val His Val Pro His CAY GTX CAY GTX CCX CAY vagy His Val Pro His Val Gly CAY GTX CCX CAY GTX GGX és ahol a képletekben A dezoxiadenozil, T timidil, G dezoxiguanozil, C dezoxicitidil, X A, T, C vagy G, Y T vagy C, Z A, T, C vagy G, ha Y-C, vagy Z-A vagy G, ha Y-T, Q T vagy A, R C és S-A, T, C vagy G, ha Q-T, vagy R-G és S-T vagy C, ha Q-A, M A vagy G, LA vagy C, N A vagy G, ha L-A, vagy N-A, T, C vagy G, ha L-C, K A vagy G, ha M-A, vagy K-A, ha M-G, W tyr vagy his jelentésű és (X)„ és (X)m egyenként olyan tetszés szerinti nukleotidszekvenciákat jelentenek, amelyekben n és m nagyobb, mint 3 és kisebb, mint 100, különösen nagyobb, mint 5 és kisebb, mint 12 - előállítására, amit egy restrikciós enzim képes felismerni és elhasítani, továbbá az (I) általános képletű kettős szálú DNS-fragmentjeinek előállítására. A találmány különösen olyan eglint kódoló kettős szálú (I) általános képletű DNS-re vonatkozik, ahol a képletben D jelentése az YTZ QRS TTY, QRS GAM YTZ AAM QRS TTY és ACX GAM TTY GGX QRS GAM YTZ AAM QRS TTY csoportból választott nukleotidszekvencia és D’ jelentése a CAY GTX CCX CAY GTX GTX nukleotidszekvencia és a többi szimbólum az (I) általános képletnél megadott jelentésű. A találmány elsősorban olyan (I) általános képletű, eglint kódoló kettős szálú DNS-re vonatkozik, ahol a képletben D jelentése az ACX GAM TTY GGX QRS GAM YTZ AAM QRS TTY nukleotidszekvencia és D’ jelentése a CAY GTX CCX CAY GTX GGX nukleotidszekvencia és a többi szimbólum az (I) általános képletnél megadott jelentésű. 20 A találmány egyik előnyös kiviteli formájában a DNS-szekvencia az 5’-végen EcoRI-gyel hasítható, a közepén Hpaü-vel hasítható és a 3’-végen BamHI-gyel hasítható nukleotidszekvenciát tartalmaz. A találmány elsősorban olyan kettős szálú DNS-re 25 vonatkozik, amely az eglinek, ill. módosított egűnek aminosavait kódoló, E.coli által előnyben részesített tripleteket tartalmaz. Ilyen tripletek a következők: Glicin (Gly) GGT Alanin (Ala) GCT 30 Valin (Val) GTT Leucin (Leu) CTG Szerin (Ser) TCT Treonin (Thr) ACT Fenilalanin (Phe) TTC 35 Tirozin (Tyr) TAC Metionin (Met) ATG Aszparaginsav (Asp) GAC Glutaminsav (Glu) GAA Lizin (Lys) AAA 40 Arginin (Arg) CGT Hisztidin (His) CAT Prolin (Pro) CCG Glutamin (Gin) CAG Aszparagin (Asn) AAC 45 A találmány a fenilalaninra a TIT kodont is és a prolinra a CCA vagy CCT kodont is alkalmazza, ezáltal az 5’-végen található EcoRI hasítási helyén, a 3’-végen található BamHI hasítási helyén, és egy Hpall hasítási helyén kívül az említett restrikciós enzimekre 50 semmilyen további hasítási helyet nem tartalmaz. Előnyös stopjel (NON) a TAG kodon. A fent bemutatott módon az eglin-C-gén előnyös kiviteli formája a (Ha) általános képletű DNS, az eglin-B-gén előnyös kiviteli formája a (üb) általános képletű DNS, és 55 a módosított (N- terminálison rövidített) eglin-C-polipeptid génjeinek előnyös kiviteli formái a (He) és (lid) általános képletű DNS-ek, ahol a képletekben A, T, G, C jelentése az (I) általános képletnél megadott és jobb megértés kedvéért megadtuk a tripletek által kódolt aminosava- 60 kát és a restrikciós enzimek hasítási helyeit. 4
