203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 matográfia vagy a fordított fázisú, nagynyomású folyadékkromatográfia, továbbá a többszörös megosztás vagy elektroforetikus módszerek, például cellulóz-acetáton végzett elektroforézis vagy gélelektroforézis, különösen poliakrilamid-gélelektroforézis („PAGE”). A találmány továbbá vonatkozik a találmány szerint előállítható új eglinaktivitású peptidekre, az ilyen peptidek keverékeire és sóikra. A találmány továbbá eljárás az új (XIV) általános 5 képlett! vegyületek, (MetVB -ProGlu ValValGlyLy sThrValAspGlnAlaAigGlu TyrPheThrLeuHis'iyrProGlnTyrAspValWpheLeuProGluLysSerProValThrLeuAsp LeuArgTyrAsnArgValArgValPheTyrAsnProGlyThrAsnValValAsn-B’ (XIV) a képletben r jelentése 1, B jelentése kovalens kötés vagy peptidcsoport, amely a természetes eglin 1-10 N-terminális aminosav építőkövét tartalmazza, például a Ser-Phe-, LeuLysSerPhe-, SeiGluLeu-LysSerPhe-, 15 PheGlySerGluLeuLysSerPhe- vagy ThrGluPheGlySer- GluLeuLysSerPhe közül valamelyik a B’ jelentése semmi vagy a természetes eglin 1-6 C-terminális aminosav építőkövét tartalmazó peptidcsoport, például a -HisVal, -HisValProHis vagy -HisValProHisValGly kö- 20 zül valamelyik, és W jelentése iyr vagy His, vagy a képletben r jelentése 0, B jelentése N-terminális acetilezett peptidcsoport, például az N-acetil-SerPhe-, N- acetil-LeuLysSerPhe-, N-acetil-SerGluLeuLysSetPhe-, N-acetil-PheGlySerGluLeuLysSerPhe- vagy N-acetil- 25 ThiGluPheGlySerGluLeuLysSerPhe - közül valamelyik, és B ’ jelentése a fenti, és W jelentése Tyr vagy His - és sóik előállítására. A találmány különösen a (XIV) általános képlett! vegyületekre - a képletben r jelentése 0, B jelentése az N-acetil-SeiGluLeuLysSerPhe- vagy N-acetil-ThrGlu- PheGlySeiGluLeuLysSerPhe-peptidcsoport és B’ jelentése a -HisValProHisValGly-peptidcsoport és W jelentése Tyr - és azok sóira vonatkozik. A találmány előnyösen a (XTV’) általános képlett! eglinszármazékokra - a képletben V jelentése N-acetil- Thr vagy Met-Thr és W jelentése Tyr vagy His - és azok sóira vonatkozik. VGluPheGlySerGluLeuLysSerPheProGluValValGlyLysThrValAspGlnAlaAigGlu TyrPheThrLeuHisTyrProGlnTyrAspValWPheLeuProGluGlySerProValThrLeuAsp LeuAigTyrAsnArgValArgValPhe'iyrAsnProGlyThrAsnValValAsnHisValProHis ValGly (XTV’) A találmány különösen az Na-acetil-eglin-C-re és annak sóira vonatkozik. A találmány szerint előállítható vegyületek, ill. az új (XIV) általános képlett! 35 vegyületek nem csak szabad formában fordulhatnak elő, hanem sóik, különösen farmakológiailag elfogadható sóik formájában is. Mivel több, szabad aminocsoportot, ill. guanidinocsoportot tartalmazó aminosavmaradékkal rendelkeznek, a találmány szerinti vegyüle- 40 tek, például savaddíciós sókat képezhetnek. Savaddíciós sóként különösen a szokásos terápiásán elviselhető savakkal képezett élettanilag elviselhető sók jönnek számításba; anorganikus savként a hidrogén a hidrogén-halogenidek (így a hidrogén-klorid), de a kénsav 45 és foszfor-, ill. pirofoszforsav is említhető; a szerves savak közül elsősorban a szulfonsavak (így a benzolvagy p-toluolszulfonsav vagy rövidszénláncú alkánszulfonsavak, például metánszulfonsav), valamint karbonsavak, például ecetsav, tejsav, palmitin- és szterain- 50 sav, almasav, borkősav, aszkorbinsav és citromsav alkalmasak. Mivel az eglinszármazékok szabad karboxilcsoportokat tartalmazó aminosavmaradékokat is tartalmaznak, amelyek az egész peptidnek savas jelleget kölcsönöznek, ezek fémsókat is, különösen alkálifém- 55 vagy alkáliföldfémsókat, például nátrium-, kálium-, kalcium- vagy magnéziumsót vagy ammóniából vagy fiziológiailag elviselhető, szerves nitrogéntartalmú bázisból levezetett ammóniumsót képezhetnek. Mivel egyidejűleg szabad karboxilcsoportokat és szabad ami- 60 no(amidino)-csoportokat tartalmaznak, belső sókat is képezhetnek. Az előállítás módjától függően a találmány szerinti vegyületeket szabad formában, belső sók vagy bázisokkal képezett sók formájában kapjuk. A savaddíciós sókból önmagában ismert módon kaphatjuk meg a szabad vegyületeket. Az utóbbiakból például a fenti sókat képző savakkal vagy bázisokkal való ismételt reagáltatással, bepárlással vagy liofilizálással terápiásán alkalmazható savaddíciós sókat vagy fémsókat kaphatunk. A belső sókat a pH megfelelő semleges pontra való állításával állíthatjuk elő. Eglin elleni monoklonális antitestek és ilyen antitesteket tartalmazó tesztkitek Az antitesteknek az a tulajdonsága, hogy specifikus antigéneket kötnek meg, a szervezeten kívül a gyakorlatban az antigének kvantitatív meghatározására (immunassay) és tisztítására (immun-affinitáskromatográfia) alkalmazhatók. Immunizált állatok széruma rendesen nagyszámú különböző antitestet tartalmaz - amelyek ugyanazzal az antigénnel a különböző kötőhelyeken eltérő affinitással reagálnak - ráadásul más antigének elleni antitesteket is, amelyek az egyed korábbi tapasztalatait tükrözik. Az antitestek sikeres alkalmazása az antigének meghatározására és tisztítására azonban nagy specifitást és reprodukálhatóságot igényel. Ezeket a köve15
