203737. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-amino-alkil-3-alkoxi-4-fenil-1,3,4,5-tetrahidro-2H-1,3-benzodiazepin-2-on-származékok és e vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
I HU 203 737 B 2 reagáltatva - ahol Hal jelentése halogénatom - egy (I) általános képletű vegyületet kapunk. A (X) és (XI) általános képletű vegyületeket általában in situ reagáltatjuk, -78 °C és a reakcióelegy forráspontja közötti hőmérsékleten, 1 -72 órán keresztül. Úgy is eljárhatunk, hogy a (X) általános képletű vegyületet egy (XII) általános képletű vegyülettel reagáltatjuk, és a kapott (XE) általános képletű vegyületből egy R[R2NH általános képletű vegyülettel való reakcióval kapjuk meg az (I) általános képletű vegyületet. A találmány szerint előállított vegyületek analgetikumként használhatók, mivel azzal a képességgel rendelkeznek, hogy emlősöknél enyhítik a fájdalmat. A vegyületek hatását a 2-feni-l,4-benzokinon által kiváltott úgy nevezett vonaglási vizsgálattal mutattuk ki egereken. Ez a vizsgálat általánosan ismert az analgetikumok hatásának meghatározására [lásd a Proc. Soc. Exptl. Bioi. Med. 95,729 (1957)]. Két találmány szerint előállított vegyület analgetikus hatását a vonaglás százalékos gátlásával fejezzük ki. Az adatokat az 1. táblázatban tüntetjük fel. 1. táblázat Vegyület Dózis Vonaglás (szubkután) gátlása (mg/testtömeg kg) <*) (+)-l -[2-(N,N-dlmetil-amino)-etü]-3-metoxi-4-fenü -1,3,4,5-tetrahidro-2H-l,3-benzodiazepin-2-on (+)-l-[3-(NN-dimetil-amino)-propü]-3-metoxi-4-fenü-1,3,4,5-tetrahidro-2H-20 37-1,3-benzodiazepin-2-on 20 37 dextrofán 15,1 50 A fájdalomcsillapító hatást akkor érjük el, ha a találmány szerint előállított vegyületet az ilyen kezelést igénylő alanynak effektiv dózisban, 0,1-100 mg/testtömeg kg/nap dózisban adagoljuk, orálisan, parenterálisan vagy intravénásán. Az előnyös dózis naponta 10- 50 mg/testtömeg kg. Különösen előnyös a napi 30 mg/testtömeg kg adagolása. Magától értetődik azonban, hogy adott alany esetén ettől eltérő dózis is adagolható. Az is magától értetődik, hogy a megadott dózisok csupán például szolgálnak, és nem korlátozzák a találmányunk oltalmi körét. A találmány szerint előállított vegyületek ugyancsak használhatók kalcium-ion antagonistaként, amelyek a szív-érrendszerére hatnak, beleértve a potenciális vérnyomáscsökkentő hatást is. A kalcium-ion antagnizmust a nitrendipin megkötő vizsgálattal lehet meghatározni. A nitrendipin megkötő vizsgálatot a következőképpen végezzük. Az alkalmazott reagensek: (1) 0,5 mólos trisz puffer, amelynek pH-ja 7,4, és amelyet úgy készítünk, hegy 66,1 g trisz HCl-t. 9,7 g trisz bázist 1 liter desztillált vízben összekeverünk, és ezután ebből l:10arányú hígítást készítünk desztillált vízzel. A (2) reagens: [5-metil-3H]-nitrendipin (70— 81 Ci/mmól), amelyet a New England Nuclear-tól szerzünk be, és (3) nif endipin. A szövetet a következőképpen készítjük elő. Hun Wistar patkányokat dekapitációval megölünk, a szívüket kivesszük és a kamrákat kivágjuk az aortákból és az amiás szövetből A kamrákat leöblítjük és 19 térfogatrész jéghideg 0,05 mólos trisz-pufferrel homogenizáljuk, amelynek pH- ja 7,4. A homogenizálást Telemar homogenizá torban végezzük. A homogenizátumot 4 réteg tüllőn leszűrjük, és 1000 g-vel centrifugáljuk 10 percig. A felülúszót dekantáljuk, és újra centrifugáljuk 48000 g-vel 20 percig. A kapott pelletet az eredeti térfogatú triszpufferben újra szuszpendáljuk, és ismét centrifugáljuk 48 000 g-vel 20 percig. Ezeket az újra szuszpendálási és újra centrifugálási lépéseket még kétszer megismételjük a kamra membránok kimosása érdekében. A végső pelletet újra szuszpendáljuk az eredeti térfogatú 0,05 mólos trisz-pufferban. Magához a kísérlethez 500 pl kamra membrán szuszpenziót alkalmazunk 50 pl 0,5 mólos trisz-puffert, amelynek pH-ja 7,4, 500 pl 5-metü[3H]-nitrendipint; 20 pJ vizsgálandó hatóanyagot; 380 pl vizet. A vizsgálatot kémcsőben végezzük, sötét helyiségben. A kémcsöveket 1 órán keresztül 25 °C hőmérsékleten inkubáljuk A vizsgálatot gyors vákuumszűréssel állítjuk le, amelyet Whaman GF/b szűrőkön végzünk. A szűrőket háromszor mossuk 5 ml jéghideg 0,05 mólos trisz-pufferral, ámelynek pH-ja 7,4, és 10 pl Liquiscint szcintillációs koktélban számoljuk meg. A fajlagos megkötődést úgy határozzuk meg, hogy kiszámítjuk az összes megkőtődés és a 0,1 pjnól nifedipin jelenlétében kapott megkötődés különbségét, ez általában 70-75%-a a teljes megkötődésnek. A teljes megkötött ligandum közelítőleg 5%-& a hozzáadott teljes mennyiségnek Az egyes hatóanyag koncentráció százalékos gátlását három mérés átlagából kapjuk A vizsgált hatóanyag IC^ értékét az adatok Jog-probit" analízisével számítjuk A találmány szerint előállított vegyületek kalciumion antagonists hatását a megkőtődés százalékos növekedésében kifejezve a 2. táblázatban tüntetjük fel 2. Táblázat Vegyület Koncentráció Növekedés amegkötó___________________________(mól x 10-3) désben (*) (+)-l -[2-(N,N-dimetil-amino)-etü]-3-metoxi-4-fenü-l,3,4,5-tetrahidro-2H-1,3-benzodiazepin-2-on 2,0 27,6 (+)-l -[3-(NN-dimetü-amino)-propil]-3-metoxi-4-fenü-1,3,4,5-tetrahidro-2H-l,3-benzidiazepin-2-on 2,0 25,7 dfltiazem (összehasonlító minta) 1,0___________85 A kalcium-ion antagnizmust, amely többek között a vérnyomás csökkentésnél előnyös, úgy érjük el, ha a 6 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
