203722. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált hidroxiaminok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 722 B 2 vízzel, nátrium-szulfát felett szárítjuk, és a maradékot éter és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. Kitermelés: 1,09 g (88%) narancsszínű kristályos anyag. Op.: 238 *C. ^-NMR (CDCl^: 6 1,3 (d, 6H, C-izopropü-CH3), 1,75 (d, 6H, N-izopropü-H), 3,28 (m, 1H, C-izopropü- CHj), 4,85 (m, 1H, N-izopropil-H), 6,6 (db, 1H, olefin- H), 6,9-7,25 (m, 9H, aromások-H), 8,85 (db, 1H, olefin-H). 55. példa N-{2-[3-(4-Fluor-fenil)-l, 5-diizopropil-4-fe -nil-pirrol-2-il]-etd}-N-(3-terc-butoxi-karbonil-2-hidroxi-propil)-hidroxil-amn (50) képletű vegyidet A vegyületet a 6. és 7. példa analógiájára a 34. példa szerinti vegyületből állítjuk elő színtelen hab formájában. 'H-NMR (CDC13): 5 1,05-1,3 (b, 6H, izopropü- CH3), 1,45 (s, 9H, terc-butil), 1,62 (d, 6H, izopropil- CH3), 2,35 (b, 22, CH3), 2,45-2,75 (b, 4H, 0%), 2,85 (b, 2H, CH2), 3,15 (b, 1H, OH), 3,3 (m, 1H, C-izopropil-H), 4,15 (b, 1H, HO-CH), 4,6 (b, 1H, N-izopropü- H), 5,2 (b, 1H, OH), 6,75-7,2 (mb. 9H, aromások-H). 36. példa N-{2-[3-(4-Fluor-fenil)-l,5-diizopropil-4-fe -nil-pirrol-2-il]-etil}-N-(3-karboxi-2-hidroxipropil)-hidroxil-amin-hidrobromid (51) képletü vegyidet A 29. példa analógiájára a 35. példa szerinti vegyületből kapjuk a nyersterméket, amelyet 200 ml kloroformmal és 200 ml metanollal (10:1 és 5:1) 215-szörös mennyiségű Kieselgelen kromatografálunk (230- 400mesh). Kitermelés: 56% színtelen kristályos anyag (éterből kristályosítva), mely 170 °C felett bomlik. Rf- 0,45 (kloroformmetanol 3:1). ‘H-NMR (CD3OD): S 1,05-1,3 (b, 6H, izopropil- CH3), 1,6 (d, 6H, izopropil-CH3), 2,3-3,2 (b, 8H), 4,2 (b, 1H, HO-CH), 4,7 (b, 1H, N-izopropü), 6,7-7,2 (b, 9H, aromások-H). Alkalmazási példa 37. példa Az enzimaktivitás meghatározás G.C. Ness és munkatársai szerint történik (ARchives of Biochemistry and Biophysics 197,493-499/1979/). Hímnemű Riko patkányokat, melyek testtömege 300-400 g, 11 napig kezeltünk altromin por takarmánnyal, melyhez 40 g kolesztiramin/kg takarmányt adagoltunk. Lefejezés után az állatok máját kivettük és jégre tettük. A májakat felaprítottuk, és háromszor homogenizáltuk 3 térfogat 0,1 mól szacharózt, 0,05 mól kálium-kloridot, 0,04 mólKxHyfoszfátot(K2HP04ésKH2P047^pH- jú elegye), és 0,03 mól etüén-diamin-tetraecetsavat, 0,02 mól ditiotreit (SPE)-puffert (szacharóz-foszfátetüén-diamin-tetraecetsav-puffer pH- 7,2) tartalmazó homogenizátorban. Ezt követően 15 percig centrifugáltuk az elegyet, és az üledéket eltávolítottuk. A maradékot 75 percig ülepítettük, a pelletet 1/4 térfogat SPE pufferben felvettük, mégegyszer homogenizáltuk, majd ismét centrifugáltuk 60 percig. A pelletet ötszörös térfogatú SPE pufferben felvettük, homogenizáltuk, és -78 "C-on befagyasztottuk, és tároltuk (enzim oldat). A teszteléshez a tesztvegyületeket, illetve a Mevinolin referencia anyagot dimetU-formamidban 5 térf.% 1 n nátrium-hidroxid hozzáadása közben feloldottuk, és 10 pl mennyiségben különböző koncentrációkban alkalmaztuk az enzim tesztben. A tesztet 20 perccel a vegyületek előinkubálása után indítottuk. Az inkubálás enzimmel történt 37 *C-on. A tesztanyag 0,38 mivolt, és4 pmólglükóz-6-foszfátot 1,1 mg marhaszérum albumint, 2,1 pmól ditiotreitet, 0,35 pmól NADP-t, 1 egység glükóz-6-foszfát-dehidrogenázt, 35 pmól NADP-t, 1 egység glükóz-6-foszfát-dehidrogenázt, 35 pmól KgHy (pH 7,2) foszfátot, 20 pl enzim készítményt és 56 nmól 3-hidroxi-3-metü-glutaril koenzim A (glutaril 3-14Q100 000 dpm-t tartalmazott. Az elegyet 60 percig inkubáltuk 37 *C hőmérsékleten, majd a reakciót 300 pl (0,24 mól) sósav hozzáadásával leállítottuk. 60 percig utóinkubáltunk 37 °C-on, majd az anyagot centrifugáltuk, és 600 pl maradékot felvittünk egy 0,7 x 4 cm-es, 5-klorid anioncserélővei (részecskenagyság 100-200 mesh) töltött oszlopra. 2 ml desztillált vízzel utána mostuk, és az eluátumot a mosóvízzel, majd 3 ml szcintillációs folyadékkal elegyítettük, és szcintillációs számlálóban számláltuk. Az IC50-értékeket intrapolálással határoztuk meg, mégpedig a %-os gátlási értékeket a vegyület koncentrációja függvényében ábrázoltuk. A relatív gátlás meghatározásához a referencia anyag, azaz a Mevinolin IC50-értékét 100-nak vettük, és ezzel hasonlítottuk össze a tesztvegyületek szimultán meghatározott IC50-értékeit. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű szubsztituált hidroxil-aminok és sói—ahol R jelentése hidrogénatom, vagy egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkücsoport, és R1 jelentése két halogénatommal vagy két 1-6 szénatomos alkücsoport tál helyettesített fenücsoport, vagy a), i), k) vagy 1) általános képletű.csoport, ahol R2 jelentése halogénatom vagy egyenes vagy elágazó szénláncú, legfeljebb 6 szénatomos alkücsoport, A jelentése fenücsoport, amely 1 -2-szeresen azonos vagy különböző halogénatommal vagy halogénatommal és fenoxicsoporttal lehet helyettesítve, B jelentése 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkücsoport, X jelentése oxigén-vagy kénatom vagy N-C3 általános képletű csoport, és C1, C2, C3 azonos vagy különböző és jelentésük egyenes vagy elágazó láncú 1-6 szénatomos alkücsoport, vagy adott esetben halogénatommal szubsztituált 6 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
