203674. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyengített pulyka rhinotracheitis vírus és azt tartalmazó vakcina előállítására
1 HU 203674 B 2 2. táblázat A károsodás pontozási rendszere 1: Váladék, amikor az orrlyukakat megnyomjuk és/vagy enyhén megütjük__________________ 2: Ongennyosedés 3: Vizes szemek____________________________ S: Megduzzadt orrdregek és/vagy babos szemek 7: Nehéz légzés vagy mélyről hangzó bugyborékol ás___________________________ 10: A pulykacsibe betegnek Utazik 3. táblázat Legyengített, illetve virulens TRT vírussal inokulált és 21 nappal később virulens vírussal fertőzött, 7 napos TRT-mentes pulykacsibékben megfigyelt klinikai betegségek* Napok az inokulálás után Átlagos betegségi pontszám/madár az inokulálást köveiden Tojás/szövettenyészet passzálással gyengített törzzsel Virulens törzzsel Nem inokulált A törzs Btörzs 1 0 0 0 3 0 0,4 1,3 4 0.5 1,8 1,6 3 1* 2,9 2,7 6 2,0 2,8 3,8 7 1,7 4,9 3,6 8 0,6 32 0,3 11 0 0,5 0 14 0 0 0 21 0 0 0 összesen 6,0 16,5 13,3 * (A és B virulens törzs különböző pulyka rhinotracheitis járványok esetén izolált törzsek) A 21. napon virulens vírussal felülfertőzve: + 1 0 elpusztul elpusztul 0 + 3 0 0 + 4 0 12 + 5 0 3,0 + 6 0 4,0 + 7 0 4,1 + 8 0 22 +10 0 0 összesen 14,5 4. táblázat CsUlóaktivitás TRT-vírus legyengített, illetve virulens törzseivel végzett inokulálás után 5 nappal elpusztított pulykacsibék légcsöveiben Pulykacsibe száma Teljes csillóaktivitás 5 légcsőből nyert lOszövettenyészetben 5 nappal az inokulálás után TojáVszövettenyészét passzálással gyengített törzzsel Virulens törzzsel Neminokulált Atörzs Btörzs i 0 32 32 7 2 13 30 40 3 3 29 38 40 4 4 9 32 39 18 5 5 39 39 7 összesen: 56 175 190 39 5. táblázat Gyengített, illetve virulens TRT-vírussal inokulált és 21 nappal később virulens vírussal fertőzött 7 napos TRT-mentes pulykacsibék antitestválasza Adagos IRT ELISA antitest titer (log2 >, az inokulálást követően Idő Tojás/szövette-Virulens törzzsel Nem nyészet passzálással gyengített törzzsel A törzs B törzs inokulált 21 nappal azinokulálásután 11,14 12,14 13,74 5,64 14 nappal a fertőzés után 9,94--10,84- - nem vizsgáltuk 6. példa Embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva passzálással legyengített pulyka rhinotracheitis vírus élő törzsét tartalmazó vakcina előállítása A vírust csirke légcső szövettenyészetet alkalmazva izoláljuk és 30 cikluson át embriót tartalmazó tojáson és légcső szövettenyészeten váltakozva végzett passzálással gyengítjük. A vírust három passzálással tisztítjuk korlátozott hígítással légcső szövettenyészeten, majd embriót tartalmazó tojásban szaporítjuk. A 72- 120 órával az inokulálás után kapott allantoisz folyadékot használjuk vakcinaként. A vírus-folyadékot szükség szerint hígíthatjuk, összekeverhetjük stabilizálószerrel, és fagyasztva száríthatjuk. Minden cső 100-1000 adagot tartalmazhat. Egy dózis ÍO^IO4 CD50-et (ciliosztatikus dózis) tartalmaz. Immunizálás 102-104 CD50 élő vakcinavírust tartalmazó dózist adagolunk háromhetes csirkéknek spray formájában. A vakcinálás után három héttel szérum-mintákat veszünk, és megvizsgáljuk pulyka rhinotracheitis ví-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
