203672. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket tartalmazó vakcina előállítására
1 HU 203672 B 2 3. példa Ebben a vizsgálatban, amely annak meghatározására irányul, hogy a vakcina rendelkezik-e immunszuppresszív aktivitással, speciális, patogén-mentes malacokat vakcinálunk a vizsgálati vakcinával és placebóval annak eldöntésére, hogy egy vakcina a találmány oltalmi körébe tartozik-e vagy sem. Hetenkénti időközökben azonos csoportból származó azonos számú malacot érzéstelenítünk és levágunk. A hörgői és hátsó garati nyirokcsomókat eltávolítjuk, paraformaldehidben fixáljuk, és paraffinba ágyazzuk. Metszeteket készítünk immun-hisztológiai vizsgálatokhoz, amelyeket bármely, a kereskedelemben kapható nyúl-antisertés IgA-val, anti-sertés IgM-mei, és anti-sertés IgG-vel végzett inkubálással hajtunk végre. A metszeteket mossuk, és tovább inkubáljuk egymás után a kereskedelemben beszerezhető biotinilezett kecske-anti-nyúl IgG-vel, kereskedelmi forgalomban kapható avidin-biotinilezett peroxidáz komplexszel, és valamilyen kromogén szubsztrátummal, pl. 4-klór-l-naf tollal vagy diamino-benzidinnel. A festett (immunglobulint tartalmazó) sejtek számát 100 mm^ szöveti metszeten meghatározzuk mind a vakcináit, mind a kontroll állatoknál. Egy vakcina akkor immunszuppresszív, amikor az immunglobulint tartalmazó sejtek száma a hátsó garati vagy hörgői nyirokcsomóban jelentősen kisebb, mint a kontroll állatokban, amint ez az immunhisztológiai vizsgálattal megbecsülhető. Ezen vizsgálat szerint a 2. példa szerinti vakcina nem immunszuppresszív. A találmány számos módosítása és változata lehetséges a fenti kitanítások fényében, és ezért a mellékelt igénypontok oltalmi körén belül más, a szakember szá - mára nyilvánvaló gyakorlati megoldások is elképzelhetők a konkrétan leírtakon kívül. 4 4, példa Császármetszéssel kapott malacokat véletlenszerű módon osztunk be egy vakcináit és egy kontroll csoportba. A vakcináit csoport az 1. példa szerinti el járással előállított 74,5 kD molekulatömegű antigént tartalmazó vakcinát kapott, míg a kontroll csoportot nem vakcináitok. A vakcináit csoport 1 hetes korban a lábba kapott szubkután injekciót (100 p.g 74,5 kDa-os antigén Freund-féle inkomplett ad juvánsban). Megfelelő vivőanyagban 3 hetes korban ismét 100 pg 74,5 kDa-os 5 antigént vittünk be a másik lábba, „booster” (emlékeztető) injekció alakjában. 8 hetes korban mindkét csoportot 106 CCU menynyiségű Mycoplasma hyopneumoniae hatásának tettük ki transztracheális bevitel révén. 12 hetes korban 10 mindkét csoportban leöltük a malacokat és boncolást végeztünk. Azt találtuk, hogy a kontroll csoportban 5 malac közül 5 mutatott 5%-nál nagyobb tüdőkárosodást A kontroll csoport esetében az átlagos súlyosság: a befo-15 lyásolt tüdőfelület 12,4%-a ± 4,7%. A vakcináit csoportban 4 közül csak 1 malac esetében észleltünk 5%nál magasabb tüdőkárosodást. Az átlagos súlyosság: a befolyásolt tüdőfelület 4,2%-a ± 4,9%. 20 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás mikoplazmás tüdőgyulladás elleni vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy egy vagy több immunszuppresszív aktivitástól mentes Mycoplasma 25 hyopneumoniae antigént és/vagy az említett antigének) egy vagy több fragmentumát adjuvánssal öszszekeverjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy több antigént keverünk össze. 30 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 10 kDa és 350 kDa közötti molekulatömegű antigén(eke)t keverünk össze. 4. Az 1 -3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 22,5 kDa, 34 kDa, 36 kDa, 35 41 kDa, 44 kDa, 48 kDa, 52 kDa, 64 kDa, 74,5 kDa, 79 kDa, 88,5 kDa, 96,5 kDa vagy 121 kDa molekulatömegű antigén(eke)t keverünk össze. 5. Az 1 -4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 5 mikrogramm/adag-20 40 mg/adag, előnyösen 100 mikrogramm/adag antigéneken keverünk össze. 5
