203671. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a nyulak vírus okozta vérzéses betegsége (rabbit haemorrhagic disease, RHD) elleni inaktivált, adjuvált oltóanyag előállítására
1 HU 203 671 B 2 Az inaktiválás hatékonyságát az oltóvírus előállításánál leírtak szerint nyulak oltásával ellenőrizzük úgy, hogy a mintából a formaldehidet előzetesen dialízis útján eltávolítjuk. A nyulaknak a 7 napos megfigyelési idő alatt egészségeseknek kell maradniuk. Az inaktivált vírusszuszpenziót tömegére számított 2 tömegrész steril, pH-6,8 kémhatás értékre beállított, 2% A1203 tartalmú alumíniumhidroxid géllel (gyártó: SUPERFOS BIOSECTOR a/s, Dánia) adjuváljuk. Az adjuvált vakcinát sterilen üvegekbe töltjük és légmentesen lezárjuk. 2. példa Mindenben az 1. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy az inaktivált vírusszuszpenzió adjuválását vele azonos tömegű inkomplett olajos immunadjuvánssal magas nyomáson (1-1,2 kPa) stabil emulzióvá való alakítással végezzük.* Az olajos immunadjuváns összetétele: 73 tömegszázalék Marcol 52 olaj (ESSO), 12 tömegszázalék SPAN-80 (ATLAS), 3 tömegszázalék SPAN-20 (ATLAS), és 12 tömegszázalék TWEEN-60 (ATLAS). Az adjuvált vakcinát sterilen üvegekbe töltjük és légmentesen lezárjuk. Az ártalmatlanság ellenőrzése Az 1. vagy 2. példa szerint előállított vakcina 1 miével, amely legalább 1:256 HA értékű vírust tartalmaz inaktiválás előtt, RHD fertőzés iránt fogékony nyulak közül 5 darabnak oltást adunk izomba vagy bőr alá egy alkalommal. A nyulakat 14 napig megfigyeljük. A megfigyelési idő alatt a helyi és általános reakciót vizsgáljuk. A vakcina ártalmatlan, ha az oltás a vakcinázott nyulakban nem okoz helyi reakciót és a 14 napos megfigyelési idő alatt a nyulak tünetmentesek maradnak. Vizsgálataink esetében mind az 5 nyúl megfelelt ennek a követelménynek. Hatékonyság ellenőrzése Az 1. vagy 2. példa szerint előállított vakcina 1 ml/egyed teljes adagjával, 1/4 ml/egyed és 1/16 ml/egyed adagjával 5-5 nyulat immunizálunk, majd az oltást követő 15. napon 1000 LDS0 vírusadaggal intraperitoneálisan fertőzzük 5 oltatlan kontroll nyúllal együtt. 10 napos megfigyelési idő után a vakcina védőértékét (PD50) Reed-Muench módszerével meghatározzuk. A vizsgálat szerint az 1. és 2. példák szerint előállított vakcina minimum 8 PD50 értéket tartalmaz [L. J. Reed és H. Muench: Am. J. Hyg. 27, 493-7(1939)]. A nyulak immunizálása A fertőzés veszélyének kitett 4 hetes kor feletti, fehér húshidbrid fajtájú nyulakat immunizálunk az 1. vagy 2. példa szerint készített vakcina egyszeri, 1 ml-es adagjával, bőr alá vagy izomba. A preventív immunizálás teljes védettséget eredményez, a betegség lappangási szakaszában oltott állatoknál a vakcinázást követő 4-5. napon a járvány teljesen megszűnik. A vakcinázás a vemhes és a szoptatós anyákra és utódaikra semmiféle káros hatást nem gyakorol. A vakcinázást követő 7. hónapban a vakcinázott nyulak 75-100%-a tünetmentesen átvészeli az 1000 LDS0 vírusadaggal végzett felülfertőzést. 3. példa Eljárás kombinált vakcina előállítására Az 1. vagy 2. példa szerint előállított vakcinát és a Phylaxia által gyártott nyulak pasteurellózisa elleni vakcinát 1:2 térfogatarányban összekeverjük és az oltóanyag gyártásban szokásos módon sterilen üvegekbe töltjük és légmentesen lezárjuk. Nyulak immunizálása kombinált vakcinával Fertőzés veszélyének kitett 4 hetesnél idősebb korú, fehér húshibrid fajtájú nyulakat immunizáltunk a 3. példa szerint előállított kombinált vakcina 2 ml/egyed mennyiségével, az előzőekben ismertetett módon. A preventív immunizálás teljes védettséget eredményezett mind az RHD, mind a pasteurellózis ellen. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás nyulak vírusos vérzéses betegsége (rabbit haemorrhagic disease) elleni inaktivált, adjuvált oltóanyag előállítására azzal jellemezve, hogy az RHDV 1/2 jelű, NCAIM V (P) 001078 számon letétbe helyezett virulens vírustörzzsel nyulakat megfertőzünk, az elpusztult nyulak belső szerveinek valamelyikéből szuszpenziót készítünk, a szuszpenzióban lévő sejteket feltárjuk, ülepítjük, a vírustartalmú részt elkülönítjük, a kapott oltóvírussal nyulakat fertőzünk meg, a nyulak elhullása után azok belső szervét az előzőekkel azonos módon feldolgozzuk, a kapott nyersvírust inaktiváljuk és immunadjuvánssal adjuváljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a nyulak belső szerveként a májat használjuk fel. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy immunadjuvánsként alumínium-hidroxid gélt alkalmazunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olajos immunadjuvánst alkalmazunk. 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inaktiválást vizes formaldehid-oldattal, vagy etüén-iminnel végezzük. 6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejteket -20 °C hőmérsékletre történő fagyasztással tárjuk fel. 7. Eljárás a nyulak vírusos vérzéses betegsége és pasteurellózisa elleni kombinált oltóanyag előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított oltóanyagot pasteurellózis elleni oltóanyaggal l:2térfogatajányban összekeverjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető ARCANUM Bt.-BUDAPEST
