203583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bakteriális fertőzések ellen védő emberi monoklonális antitest-készítmények és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203583B 33 34 4. Táblázat Baktériumok Neutrofüek Antitest Komplement A bevitt baktériumok %-os elroncsolódása E.coli01:Kl és 018X1 + 9B10 a 0 E.coli01:Kl és018:Kl + 6Fllb + 0 E. coliOLKl és018Xl — 9B10 + 0 E. coliOLKl és 018X1 + 9B10 + . 99% N. meningitidis B csoport + 9B10 — 0 N. meningitidis B csoport + 6F11 + 0 N. meningitidis B csoport — 9B10 + 0 N. meningitidis B csoport + 9B10 + 99% 3-)= hővel maktivált (56 ’C percen át) humán komplement *(6F11)- Pseudomonas aeruginosa Fisher-féle 2. immun típus elleni IgM monoklonális antitestet tartalmazó tenyészet felülúszó 5. Hogy a fenti hipotézist megvizsgáljuk, állatokat védő tanulmányokat végzünk 9B10 antitesttel és számos KI pozitív és KI negatív E. coli szerotípussal, valamint egy N. meningitidis B csoport szerotípussal (H313 törzs, amelyet Dr. Frasch Carl-tól kaptunk, Laboratory of Bacterial Polysaccharides, Office of Biologies, Food and Drug Administration, Bethesda, Maryland). Az egyes bakteriális kihívásokhoz nőstény tenyésztett Swiss-Webster egereket (20-22 g súllyal) három csoportra osztunk, mindegyik csoport 10 egeret tartalmaz. Reprezentatív kísérletet hajtunk végre az alábbiak szerint. Csoport Baktérium Antitest A E. coli KI 9B10 B E.COÜK2 6F11 C E. coliK2 9B10 Minden csoportot, amely antitestet kap, intravénásán injektálunk200 pl steril PBS-sel, amely 25 p.g tisztított antitestet tartalmaz. Két órával később az összes állatot intraperitoneális kihívásnak vetünk 30 alá 300 pl élő baktériummal, amely a megfelelő baktériumtörzs 3LD5 Qnennyiségét tartalmazza. A baktérium-szuszpenziót előzőleg olyan módon készítettünk logaritmikus növekedési fázisban levő folyékony tenyészetből, hogy a baktériumokat 35 centrifugáltuk, kétszer mostuk PBS-ben, és újra szuszpendáltuk megfelelő koncentrációra PBS-ben. Az állatokat öt napos időtartamon át figyeljük. 24- 28 órán belül a kihívás után az összes B-csoportbeli (nem megfelelő antitest) és C csoportbeli (nem meg- 40 felelő organizmus) állat már elpusztul, ezzel ellentétben azok az állatok, amelyek a 9B10 antitestet kapták (A csoport) élnek és tünetmentesek. Ezt az állatot védő modellt használjuk, hogy a 9B10 antitest terápiás hatását demonstráljuk az itt 45 leírt két fajhoz tartozó organizmusokkal végzett bakteriális kihívás ellen. Ezeknek az adatoknak az összefoglalását az 5. Táblázatban mutatjuk be. 5. Táblázat Kihívást jelentő baktérium Antitest Túlélő/kihívás % túlélés E. coli KI 9B10 10/10 100% E. coli KI. 6Flla 0/10 0% E. coli K2C 9B10 0/10 0% N. meningitidis 9B10 5/5 100% B csoport N. meningitidis 6F11 0/5 0% B csoport E. coliK2 9B10 0/5 0% %F11 antitest a Pseudomonas aeruginosa Fisher-féle 2. immuntípusra fajlagos, és negatív kontroll antitestként szolgál az E. coli K2 nem reaktív a 9B10 antitesttel, és nem fajlagos kontroll organizmusként szolgál 18
