203582. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amicin és amicinszármazékok és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, valamint ezeket tartalmazó fungicid készítmények
1 Hü 203 582 B 2 készítjük, hogy spórás micéliummot tápoldatba oltunk, és 48-72 órán át növekedni hagyjuk. Spórás micélium úgy nyerhető, ha a törzset körülbelül 7 napon át szüárd vagy folyékony közegen, például élesztő-maláta-agar-tápon növekedni hagyjuk. A fermentáció lefolyását nyomon követhetjük a tenyészet pH-értéke vagy micéliumtömege alapján, vékonyrétegkromatográfiás eljárással vagy a biológiai aktivitás vizsgálatával. Az amicin és a megfelelő dezmalonü-származék mind a micéliumban, mind a tenyészlé szűrletében megtalálhatók. A megnevezett vegyületeket a fermentléből a termék kémiai, fizikai és biológiai tulajdonságainak figyelembevételével ismert eljárásokkal különítjük el. Az antibiotikum-koncentrációnak a fermentlében vagy az egyes feldolgozási lépések anyagaiban való koncentrációját vékonyrétegkromatográfiás eljárással állapítjuk meg. Például Kieselgélt alkalmazunk nbutanol — ecetsav — víz futtatóelegy felhasználásával, a képződött mikróbaellenes hatású anyag mennyiségét célszerűen standard mintához hasonlítjuk. A vegyületek elkülönítésére a fermentlevet és a micéliumot először apoláros szerves oldószerrel, például kloroformmal vagy etil-acetáttal extraháljuk, hogy az apoláros szennyeződéseket eltávolítsuk. Ezután poláros oldószerrel, például alacsony széntartalmú alkanolokkal vagy kloroform és etil-acetát alacsony szénatomszámú alkanollal alkotott elegyével exrtraháljuk. A tiszta állapotban való elkülönítést előnyösen megfelelő közegben, például Kieselgélen, alumínium - oxidon, vagy ioncserélőkön érhetjük el, amelyekről a vegyületeket szerves, poláros oldószerekkel, vagy oldószerelegyekkel, például etü-acetáttal, etü-acetát és alacsony szénatomszámú alkanol elegyével, amely elegy adott esetben vizet is tartalmazhat, illetve ioncseréhez megfelelő sógradienssel, például konyhasó vagy trisz-HCl gradienssel eluáljuk, és az antibiotikus aktivitással bíró frakciókat összegyűjtjük. A tiszta amicin amorf anyag. A vegyület poláris oldószerekben, például vízben, metanolban és DMF-ban oldható, magasabb szénatomszámú alkoholokban mérsékelten oldható, apoláris oldószerekben, például kloroformban, etü-acetátban vagy éterben nem oldható. az amicinnek származékaivá való alakítását ismert módon végezzük. Így például az R3 helyén alkilhelyettesítőt tartalmazó amicinszármazékok az amicinnek megfelelő alkoholokkal savas körülmények között szerves oldószerben való reagáltatásával állíthatók elő. Megfelelő alkoholok például az 1-4 szénatomos alkanolok. Előnyösen az alkoholt magát alkalmazzuk oldószerként is. A reagáltatást végezhetjük -20 és +40 ‘C közötti hőmérsékleten, előnyösen szobahőmérsékleten. A reakcióidő az alkalmazott alkoholtól függően változó, körülbelül 10 perc és 4 óra közötti. A dezmalonil-származékot úgy állítjuk elő, hogy az amicinről a malonsav-félésztert bázikus, savas vagy semleges körülmények között vízben vagy rövidszénláncú alkoholokban, például metanolban, etanolban vagy izopropanolban lehasítjuk. További komponensként a 22/23-helyzetben dehidrált vegyületet (Ha) nyerjük. A reakcióhőmérséklet ebben a reakcióban - 30 és +40 *C közötti, előnyösen szobahőmérsékleten végezzük a reagáltatást. A dezmalonil-származékból a megfelelő alkohollal savas körülmények mellett származékot képezve nyerjük az R3 helyettesítő helyén alkil-acetálokat tartalmazó vegyületeket. Az alkoholok alkalmazhatóságára az R3 helyén alkü helyettesítőt hordozó vegyületekre az előzőekben leírtak vonatkoznak. Ennél a reakciónál az R3, R4-dialldl-származék is keletkezik. A gyűrűs félacetál reduktív eljárásokkal, például bór-hidridekkel vagy alumínium-hidridekkel, mint a NaBH4 vagy lítium-alumínium-hidrid, poláris oldószerben, például vízben vagy rövidszénláncú alkoholokban felnyitható. Az amicinnek a származékai is mikróbaellenes hatást mutatnak, különösen hatásosak baktérium-csírákkal, valamint humán-patogén, fitopatogén és élelmiszer romlást okozó gombákkal szemben. Az amicin és származékai a nifimicinhez viszonyítva jobb hatásukkal, csökkent toxicitásukkal és jobb vízoldhatóságukkal tűnnek ki. Az amicin és származékai szüárd állapotban és oldatban 3 és 9 közötti, különösen J és 8 közötti pH-tartományban stabilak és szokásos galenikus készítményekké feldolgozhatok. A továbbiakban a találmányt példákban mutatjuk be. A megadott százalék értékek tömeg%-ot jelentenek, és a folyadékok elegyítési aránya térfogatarányra vonatkozik, ha más megjelölés nem szerepel. 1. példa a) Streptomyces parvullus DSM 3816 spóraszuszpenzió előállítása A tápközeg összetétele: glicerin 12,5 g arginin 1,0 NaCl 1,0 g K2HPO4 1,0 g MgS04.7H20 0,5 g agar 15,0 g nyomelemoldat 2,5 ml desztillált víz 11 A nyomelemoldat összetétele: CaCl2.2H20 30,0 g vas(HI)-citrát 1,0 g MnS04 0,2 g ZnQ2 0,1 g CuS04.5H20 0,025g Na2B4O,.10H2O 0,02 g Caa2 0,0048 Na2Mo04H20 0,01 g desztillált víz 11 Az előzőekben ismertetett táptalajt tartalmazó ferde-csöveket DSM 3816 oltóanyaggal beoltjuk, majd 8 napon át 30 ‘C hőmérsékleten tartjuk. A csőről a spórákat 3 ml 0,9%-os, 0,1% Tween 80-at tartalmazó nátrium-klorid-oldattal mossuk le, és felhasználásig 4 *C hőmérsékleten tároljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
