203580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a GE 2270 antibiotikum A faktor és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203580B A találmány tárgya eljárás új, GE 2270-nek nevezett antibiotikum A faktor, valamint ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények különösen olyan fertőző betegségek kezelésére alkalmasak, amelyek az antibiotikumra érzékeny mikroorganizmusok hatására alakulnak ki. A találmány szerinti vegyületek aktívak mint növekedést elősegítő szerek is állatokban, így a baromfi, sertés, kérődzők stb. esetében. A találmány tárgya eljárás a GE 2270 antibiotikum A faktor előállítására, amely abból áll, hogy a Planobispora rosea ATCC 53773 mikroorganizmust vagy ennek egy GE 2270 antibiotikum A faktort termelő mutánsát vagy variánsát tenyésztjük, és az antibiotikumot elkülönítjük a micéliumból és/vagy a fermentléből. A Planobispora rosea ATCC 53773-at egy talajmintából különítettük el és helyeztünk letétbe — a Budapesti Szerződés előírása szerint — 1988. 06. 14., az ATCC-ben (Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok). A törzs az ATCC 53773 letéti számot kapta. A GE 2270 antibiotikum A faktor előállítását úgy hajtjuk végre, hogy egy, a termelésére képes Planobispora törzset — azaz. a Planobispora rosea ATCC 53773-at vagy ennek a GE 2270 antibiotikum Afaktort termelő variánsát vagy mutánsát — aerob körülmények között egy vizes táptalajban tenyésztjük, amely táptalaj asszimilálható szén- és nitrogén-forrásokat és szervetlen sókat tartalmaz. Számos, a fermentációs területen általában alkalmazott táptalaj felhasználható, bizonyos táptalajokat azonban előnyben részesítünk. Kitüntetett szénforrás a glükóz, maunóz, galaktóz, keményítő, kukoricaliszt. Kitüntetett nitrogén-forrás az ammónia, nitrátok, szójaliszt, peptonok, húskivonat, élesztőkivonat, tripton, aminosavak. A táptalajban alkalmazható szervetlen sók között jelen vannak a szokásos oldható sók, amelyek képesek nátrium-, kálium-, vas-, cink-, kobalt-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, foszfát-, nitrát stb. ionok leadására. Az antibiotikumot termelő törzset rendszerint elő-tenyésztjük rázott lombikban, majd ezt a tenyészetet használjuk fel közepes méretű üvegfermentorok beoltására lényegesebb mennyiségű antibiotikum előállítására. Az elő-tenyésztéshez használt táptalaj ugyanaz lehet, amelyet nagyobb fermentációkhoz használunk, de más táptalajok is alkalmazhatók. A GE 2270 antibiotikum A faktort termelő törzs 20 és 40 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 24 és 35 “C között tenyészthető. A fermentáció közben az antibiotikum-termelés oly módon követhető, hogy a fermentlé vagy a micélium-kivonatok antibiotikus aktivitását pl. biológiai vizsgálatokkal vagy TLC vagy HPLC eljárással meghatározzuk. Kísérleti organizmusként a GE 2270 antibiotikum A faktorra érzékeny organizmusok—pl. a Bac. subtüis és a S. aureus — használhatók. A biológiai vizsgálatot előnyösen agar-diffúziós módszerrel végezzük, agar lemezeken. A maximális antibiotikumtermelés általában a fermentáció 2. és 5. napja kö1 zött következik be. A GE 2270 antibiotikum A faktort úgy állítják elő, hogy a Planobispora rosea ATCC 53773 törzset vagy ennek egy 2270 antibiotikum A faktort termelő mutánsát vagy variánsát tenyésztjük. Az antibiotikum főleg a micéliumban található. A találmány leírásában a „GE 2270 antibiotikum” kifejezést általában úgy tekintjük, hogy az a GE 2270 antibiotikum komplexre — ahogyan azt a fermentációs eljárás végén kinyerjük (1- a 2. példa) —vonatkozik. A GE 2270 antibiotikum A f aktor a a komplex f ő komponense. A Planobispora rosea ATCC 53773 morforlógiai jellemzői A Planobispora rosea ATCC 53773 jól növekszik a legtöbb szokásos táptalajon. A vegetatív micélium hosszú, szabálytalanul elágazófonalakat képez (0,5-1,0 pm), amelyek áthatolnak az agaron és annak felületén összefüggő növekményt képeznek. A micélium nem fragmentálódik, függetlenül attól, hogy folyékony vagy szilárd táptalajon tenyésztjük. Színe — a legtöbb vizsgált táptalajon — a világos korall színűtől a rózsaszínű koraUig változik, A légmicélium hosszú, hullámos és vékony hifákból áll, kevés oldalirányú elágazással és a levegőben lényegében az agar felületével párhuzamosan növekszik. A légmicélium — ha képződik — fehéres-rózsaszín színű. A sporangiumok különállóan, vagy csoportokban alakulnak ki a légmicélium hifái mentén; kb. 6,0-8,0 p hosszúak és 1,0-1,2 p szélesek. A hifákhoz rövid sporagium-hordozók (hosszúságuk 1,0-2,0 p) közvetítésével kapcsolódnak. Mindegyik sporangiumban egy hosszirányú egyenes spóra-pár alakul ki (3,0-3,5 x 1,0-1,2 pm). A sporangiumokban a spórákat keresztirányú válaszfal különíti el egymástól. A sporangium burkából való kiszabadulás után a spórák csillós ostorok segítségével válnak mozgékonnyá. A Planobispora rosea ATCC 53773 tenyészetének jellemzői A tenyésztési jellemzők vizsgálatára a Plonobispora rosea ATCC 53773-at különböző standard táptalajokon tenyésztjük, amelyeket Shirling és Gottlieb javasol (E. B. Shirling, D. Gottlieb, Method for characterization of Streptomyces species. Int. J. Syst. Bacteriol. 313-340,1966), és ezek körét kiegészítettük több olyan táptalajjal, amelyet Waksman ajánl (S. A. Waksman; The Actinomycites. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, Vol 2,328-334). A szín-meghatározást, szükség esetén, Maerz és Paul módszerével végeztük (A. Maerz, M. Rea Paul: A Dictionary of Color. 2. kiadás, McGraw-Hill Book Co. Inc., New York, 1950). Az organizmusnak azt a képességét, hogy különböző szénforrásokat hasznosítson, a Shirling és Gottlieb által leírt módszerrel vizsgáltuk. A tenyésztési, a fiziológiai jellemzőket és a szén - forrás-hasznosításra vonatkozó információt az I., II. és ül. Táblázatban mutatjuk be. Az I. táblázat adatait 2 héten át 28 °C-on való tenyésztés után határoztuk meg. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
