203565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kis molekulatömegű heparin, heparán-szulfát, dermatán-szulfát és sóik, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 Hü 203 565 B 2 feloldunk 30 ml vízben (6,6 g/100 ml-es oldat). Az oldathoz 60 perc alatt hozzáadunk 15 ml 7,2%-os hidrogén-per oxidot, a pH-t nátrium-hidroxiddal 7-n, a hőmérsékletet 50 'C-on tartjuk. A reakció végén a reakcióclegyhez adunk 2 g nátri- 5 um-acetátot, lOOmgEDTA-tés 100 ml etanolt. A keletkező csapadékot szűréssel összegyűjtjük, metanollal mossuk és 15 ml vízzel feloldjuk. Az oldatot ecetsavval 4,5 pH-ra savanyítjuk és IRC 718 amberlite gyantával töltött kolonnán eluáljuk (1,2 x 12 cm), az eluátum pH-ját 0,45 g nátrium-acetáttal 5,5-re beállítjuk, végül 30 ml metanolt adunk hozzá. A depolimerizált heparán-szulfát kicsapódik, amelyet összegyűjtünk és szárítunk. íly módon 1,18 g terméket (59% kitermelés) kapunk, amelynek jellemzőit az 5. táblázatban közöljük. 5. Táblázat Termék Molekulatömeg U-APTT U-AXa S% Uronsav (%)-so3h/ /-COOH HS 436-7/08 20800 5,32 19,45 5,95 23,52 1,53 LMWHS 5300 10,49 5,45 22,05 1,48 8. példa 5 g nyers heparint (molekulatömeg 14 500 dalton) 100 ml 0,01 mól/l-es Cu++-só oldatba öntünk (5 g/100 ml-es oldat). A rézsó oldat 5% nátrium-kloridot és 5% nátrium-acetátot tartalmaz. A reakcióelegyhez állandó keverés közben 50 ml 1,6 mól/l-es nátrium-perszulfát oldatot adunk és a reakcióelegyet 58 'C-ra hevítjük. Az elegy pH-ját nátrium-hidroxid adagolásával 7 körüli értéken tartjuk. Az oldatot lehűtjük. A nyers reakcióterméket 350 ml metanollal kicsapatjuk, a csapadékot 50 ml vízben ismét feloldjuk. Az oldatot OH‘ formájú anioncserélő gyantával töltött oszlopon (4,2 x 15 cm), majd H+ formájú kationcserélő gyantával töltött oszlopon (4,2 x 10 cm) eluáljuk. Az eluátumotpH- 7-re semlegesítjük és hozzáadunk 3 g nátrium-acetátot, majd 200 ml metanollal kezeljük. A keletkezett csapadékot szűréssel összegyűjtjük, így szárítás után 3,47 g (69,5% kitermelés) nagy tisztaságú heparint állítunk elő, amelynek molekulatömege 3900. 9 * * 9. példa. Sóképzés kalciummal 200 g OP 146 LMW heparint [átlagos molekulatömege 4700; U-AXa/mg- 88,67; és U-APTT/mg- 28,4; 9,55% kén és 27,8% uronsav tartalom, az R3 arány-S03Heq/-COOH eq- 2,08 (potenciometrikus vizsgálat)] öntünk 2000 ml vízbe és az oldatot erősen savas H+ formájú polisztirol gyantát tartalmazó kolonnán (4,2 x 100 cm) átvezetjük. A határozottan savas eluátumot kalcium-hidroxid oldattal folyamatosan semlegesítjük. Az eluálás végén hozzáadunk 60 g kalcium-kloridot és az LMW kalcium-heparint 2 térfogat metanollal kicsapjuk. A termék szárítása után 191 g OP 149 Ca (95,5% kitermelés) heparm-kalciumsót nyerünk, amelynek molekulatömege 4600 dalton és a következő jellemzőkkel rendelkezik: S-1063% uronsav- 28,78%, R3- 2,24 (potenciometrikus meghatározás) Ca- 9,58% (atomabszorpciós vizsgálat) Na- 0% (atomabszorpciós vizsgálat) U-APTT- 25,2/mg, U-AXa- 84,2/mg (kromogénes módszerrel végzett meghatározás). Az így kapott készítmény pirogénmentes. 10. példa A találmány szerinti eljárással depolimerizált heparint (OP 118 K, U-AXa (kromogénes) 94,81/mg és U-APTT 29,92/mg) a bélrendszeren keresztül adagoljuk patkányoknak 35 mg/kg testtömeg dózisban. Oszszehasonlításként ugyanebben a dózisban heparint (nem depolimerizált) adunk a patkányoknak. Adott intervallumokban összegyűjtjük a mintákat és a patkányok plazmájában mérjük az anti-AXa (anti-aktivált X-faktor) aktivitást. A 6. táblázatban közöljük a mérési eredményeket. 6. Táblázat Termék N# perc mcg/ml AUC* LMW/OP118K 1 0 0 2 15 13,9 3 30 19,1 4 60 32,3 3538,7 5 90 26,5 6 120 11,7 7 240 5,1 8
