203565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kis molekulatömegű heparin, heparán-szulfát, dermatán-szulfát és sóik, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 565 B 2 követi. A két anyag farmakokinetikáját patkányban, az adott ED50 értéknek megfelelő mennyiség szubkután adagolásával vizsgáljuk. A koncentrációkat az idő függvényében Heptest meghatározással vizsgáljuk [Yin E. T. és munkatársai, B. B. A., 201,387 (1970) és Yin E.T. és munkatársai, J. Lab. Clin. Med., 81, 298 (1973)]. Eredményeinket a 12. táblázatban és a 7. ábrán ismertetjük. A 7. ábrán 10 mg/kg DS OP 352 és 6 mg/kg LMW-DS OP 370 szubkután beadása után Heptest módszerrel meghatározott plazmakoncentrációk láthatók az idő függvényében. Az AUC értékek a következők: LMW-DS OP 37063,6 mg/ml/perc DS OP 35236,5 mg/ml/perc A fenti jellemzők azt eredményezik, hogy az LMW-DS OP 370 biológiai hozzáférhetősége (hasznosulása) 2,92-szer nagyobb, mint az azonos tömegű természetes dermatán-szulfáté. Továbbá a farmakokinetikus profilon mindkét vegyüld esetén koncentráció-maximum észlelhető az adagolás után 2 óra múlva, és egy további csúcs jelentkezik az adagolás után 8 órával, de ez csak az LMW-DS OP 370-re jellemző, mivel az LMW-DS, a természetes DS-től eltérően, arról a speciális helyről, ahol koncentrálódott, visszajut a keringésbe. Az LMW-DS sajátos farmakokinetikája szolgál magyarázatul a kísérletekben igazolt hosszan tartó hatására és trombolitikus aktivitására. Trombolitikus aktivitás Vénás trombózis modellben, patkányon vizsgáltuk a hatás farmakokinetikájá.t [Reyers J. és munkatársai, Throm. Rés., 18,669-674 (1980)]. Ebben a modellben a hatóanyagot a trombolitikus jelenség megkezdődése után (2 órával a vena cavra elkötése után) adjuk be, hogy a hatóanyag terápiás hatását és a hatás tartamát vizsgáljuk. Eredményeinket a 13. táblázatban és a 8. ábrán mutatjuk be. A táblázatban és az ábrán látható értékek a trombus tömegét jelentik mg értékbenlofejezve 100 mg/kg LMW-DS OP 370, illetve 50 mg/kg természetes DS OP 352 szubkután beadásától eltelt idő függvényében patkányon végzett hatáskinetikai 5 összehasonlító vizsgálatban. Nem várt módon azt észleltük, hogy az aktivitás az adagolást követően 2 óra múlva nyilvánvalóvá válik, maximumát az adagolás után 4 órával éri el, és 6-8 órán át megőrzi. Az LMWDS ED50 értékét a természetes dermatán-szulfátéval 10 összehasonlítva értékeljük a hatóanyag beadása után 6 órával. Eredményeinket a 14. táblázatban ismertetjük. Az LMW-DS hatszor aktívabbnak bizonyul, mint a természetes dermatán-szulfát. Az aktivitás növekedé- 15 sének összetevői a következők:- kétszeres növekedés származik a depolimerizációs eljárásból (lásd a 10. táblázatban);- háromszoros növekedés tulajdonítható a jobb farmakokinetikának (lásd a 12. táblázatban). 20 Az előzőekben ismertetett jellemzőkből az alábbi következtetéseket vonjuk le. A találmány szerinti eljárással előállított 6000 dalion molekulatömegű LMW-DS természetes dermatán-szulfáttal való összehasonlításából az tűnik ki, 25 hogy az LMW-DS- diszulfát-diszacharid %-os értéke magasabb, mint ha a depolimerizációs eljárás során részlegesen megőrződtek volna a legjobban szulfátéit szekvenciák, 30 - antitrombotikus aktivitása megnövekedett, különösen szubkután adagolás esetén,- trombolitikus aktivitása megnövekedett,- biológiai hozzáférhetősége jelentősen megnövekedett, 35 - fibrinolitikus aktivitása megnövekedett. A kapott aktivitások sorozata olyan terméket jellemez, amelynek léte a dermatán-szulfát gyökös depolimerizálásának elvégzése előtt nem volt nyüvánvaló. 8. Táblázat Természetes dermatán-szulfát és LMW dermatán-szulfát összehasonlítása Minta MWwp) S% Uronsavak %-scycooH^ apttW E/mg AXa^ E/mg OP352 30,000 5,5 34,6 0,96 1 0,5 OP370<1> 6,000 6,1 33 1,12 1,4 9,0 (1) Előállításaa 13. példa szerint. (2) Nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással meghatározva. (3) Potenciometrikus eljárással [Mascellani G. és munkatársai, II Farmaco, Ed. Pr. 43,165 (1988)]. (4) Basu D. és munkatársai szerint (NewEngl. Med. J., 287,324 (1972)]. (5) Teien ANf. és munkatársai szerint [Thromb. Res., 10,399, (1977)]. 9. TáblázatAlkotó diszacharidok Minta ADÍ4S ADÍ6S ADiOS ADiDiS OP352 80% 7% 9% 4% OP370 85% 5%-10% A táblázatban alkalmazott rövidításek jelentése a következő: 14
