203479. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TRH, vagy analógjai mikro kapszulázására
1 HU 203 479 B 2 tornák számának növekedése, amelyeket a hidrofil hatóanyag mennyiségének növekedése vált ki. Összehasonlításként a fent megadott módon mikrokapszulát állítunk elő azzal a különbséggel, hogy 53 mg TRH-t oldunk 0,5 ml vízben, továbbá, hogy viszonylag nagy mennyiségi!, pontosabban 4 g vagy 6 g PLGA-t oldunk 4,5 ml diklór-metánban, és hogy a víz-az-olajban emulzió viszkozitását a vízben történő szárítás során mintegy 2000 cp értékre növeljük. A TRH mennyisége a PLGA-ra vonatkoztatva 1,33 tömeg%, illetve 0,88 tömegek. A kapott mikrokapszula 77%, illetve 98% hatóanyag-felvételt mutat. A kezdeti hatóanyag-felszabadulás azonban eléri a 71%, illetve 67% értéket, mivel késleltetést egyáltalán nem tudunk elérni. 2. példa 100 mg TRH-t (szabad forma) 0,5 ml desztillált vízben vagy ekvimoláris mennyiségű boikősav, citromsav, ecetsav vagy sósav 0,5 ml vizes oldatában oldunk, majd 5 g PLGA 5 ml diklór-metánban felvett oldatát adjuk hozzá. Ezután az 1. példában leírt módon TRH-t vagy ennek sóját tartalmazó mikrokapszulát állítunk elő. A háromfázisú emulzió előállítása során mindkét folyékony fázist 15 *C hőméréskletre állítjuk. A kapott mikrokapszulák hatóanyag-felvételét és kezdeti hatóanyag- felszabadulását a 2. táblázat mutatja. 2. táblázat Tételszám TRH-só Hatóanyagfelvétel (%) Hatóanyag 1 nap után (%) (a) 53. szabad 98,5 84,2 54. tartarát 93,2 0 55. citrát 91,8 0 56. acetát 90,4 66,8 57. hidroklorid 85,7 1,2 (a)-n-3 esetben A TRH beépülés minden esetben jó a víz-az-olajban emulzió magas viszkozitása miatt. Másrészről azonban, a TRH mennyisége viszonylag alacsony ebben a példában, potosabban 2 tömeg% a PLGA-ra vonatkoztatva, ezért feltehető, hogy a mikrokapszula tulajdonságait erősen befolyásolja az alkalmazott só típusa. A sav hatása egyértelműen kimutatható. Míg a szabad formájú TRH az első napon csak 15,8%-os felszabadulást mutat, a hatóanyag a kezdeti szakaszban majdnem teljesen, potosabban 98,8-100%-ig felszabadul borkősav, citromsav és sósav alkalmazása esetén. Ezzel szemben ecetsav, vagyis gyenge sav adagolásakor a kezdeti felszabadulás viszonylag alacsony (33,2%), ha a TRH-t a PLGA-ra vonatkoztatva 5 tömeg% mennyiségben alkalmazzuk még jobb (22,6%), de valamivel több, mint a szabad TRH esetében. A fenti eredmények arra engednek következtetni, hogy a felvett hatóanyag-mennyiség növelését a hatóanyag-polimer kölcsönhatás befolyásolja a stabil vízaz-olajban vagy víz-az-olajban-a-vízben típusú emulzió kialakításával. Befolyásolja továbbá a mikrokapszula falának megerősítését és a kezdeti felszabadulás csökkentését a hatóanyag diffúziójának és a mikrokapszulán keresztüli felszabadulásának gátlásával. Kis pKa értékű sav előnyös hatást vált ki, mivel a tejsavvagy glikolsav-maradék segítségével bekapcsolódik az említett kölcsönhatásba. 3. példa Az 1. példa szerint előállított mikrokapszulánál in vitro hatóanyag-felszabadulást és patkánynak szubkután adagolva in vivo hatóanyag-felszabadulást (a mikrokapszulában visszamaradó hatóanyag mennyisége az adagolás helyén) mértük. A mérési eredményeket a 3. és 4. táblázat tartalmazza. 3. táblázat In vitro hatóanyag-felszabadulás (a mikrokapszulában visszamaradó hatóanyag, %, n-3 esetben) Hatóanyag Tétel 1 nap 1 hét 2 hét 3 hét 4 hét TRH 50 94,5 82,2 59,0 44,6 7,8 4. táblázat In vivo felszabadulás (a mikrokapszulában visszamaradó hatóanyag, %, n-3 esetben Hatóanyag Tétel 1 nap 1 hét 2 hét 3 hét 4 hét TRH 50 79,8 72,8 31,3 16,7 3,2 A mérési eredmények egyértelműen mutatják, hogy a PLGA-ból (tejsav/glikolsav arány 75:25, átlagos móltömeg 14 000) és a polimerre vonatkoztatva 5 tömeg% szabad TRH-ból előállított mikrokapszula kedvező felszabadulást mutat in vivo körülmények között is, vagyis alacsony kezdeti felszabadulást hosszú időn keresztül jól szabályozott hatóanyag-felszabadulás követi. Elektromikroszkópos felvétel szerint az előállított mikrokapszula gömb alakú és szabályos formájú, átlagos átmérője 10-40 mikron. A mikrokapszulák 23-22 méretű tűvel megfelelő diszperziós közeg alkalmazása esetén könnyen és simán befecskendezhetők. 4. példa 50-1000 mg CG-3509 (szabad forma) 0,5 ml vízben történő feloldásával első vizes fázist készítünk. Az olajos fázis előállításához 5 g PLGA-t 6,25 ml diklór-metánban oldunk. Az olajos fázist Polytron (Kinematika, Svájc) keverővei történő keverés közben az első vizes fázishoz adagoljuk. A kapott víz-az- olajban emulziót 15-18 “C hőmérsékletre hűtjük és előzetesen 18 °C hőmérsékletre hűtött 1,250 ml 0,5 tömeg%-os vizes zselatinoldatra öntjük, majd turbinás homogenizáló ke-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
