203470. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzopirán-2-karbonsav származékokat tartalmazó helyi alkalmazású, bőrgyógyászati, gyulladásgátló hatású készítmények előállítására
1 HU 203 470 B 2 A találmányunk szerinti eljárással előállítható, helyi felhasználásra alkalmas gyógyászati készítmények előállításának részleteit a példákban ismertetjük. A találmányunk szerinti eljárással előállítható gyógyászati készítmények általában kb. 0,1-10 tömeg% - különösen előnyösen kb. 0,5-5 tömeg% - hatóanyagot tartalmazhatnak. A hatóanyag-tartomány alsó és felső határa a kezelendő beteg állapotának súlyosságától és korától, valamint az adott hatóanyag hatáserősségétől, a kezelés időtartamától és a hatóanyag koncentrációjától függ. A gyulladásgátló hatást előidéző hatóanyagmennyiség minden esetben elegendő a gyulladás tüneteinek enyhítéséhez, illetve a bőrvörösség, viszketés, hámlás, duzzadás stb. csökkentéséhez a gyulladás helyén. A találmányunk szerint előállított készítményekkel a kezelési eljárást gyakorlatilag oly módon végezhetjük el, hogy a hatóanyag-tartalmú kenőcsöt, krémet, oldatot, öblítőfolyadékot, lemosófolyadékot, gélt stb. vékony rétegben a gyulladt bőrfelületre permetezzük vagy a gyulladt bőrfelületet ezzel a készítménnyel vékonyan bedörzsöljük; a kezelést naponta egy-négy ízben végezzük el, a hatóanyagot a kívánt dózisban alkalmazva. A találmányunk szerinti eljárással előállítható készítmények hatékonyságát melegvérű állatokon az alábbi tesztekkel igazoljuk: /. Véredény permeabilitás teszt, (in vivo) patkányon és tengeri malacon a) Leukotrién (LTD4) önmagában 500-600 g tömegű hím tengeri malacokat (Hartley törzs) és 250-300 g tömegű hím patkányokat (Sprague-Dawley) 50 mg/kg testtömeg piril-amin-maleát (mint hisztamin) és 50 mg/kg metil-szergid-maleát (szerotonin-antagonista) intraperitoneális befecskendezésével előkezelünk. Az állatokat 30 perc múlva metánnal érzéstelenítjük [1,6 g/kg]. Fecskendő segítségével 0,05 ml változó leukotrién (LTD4) koncentrációjú (0,2-200 pg/ml) nátrium-klorid-oldatokat fecskendezünk intradermálisan az érzéstelenített állatok négy különböző helyébe. Közvetlenül ezután minden patkány farokvénájába 1,0 ml Evans-kék színezéket és minden tengeri malac jobb fülének vénájába 1,25 ml Evanskék színezéket fecskendezünk. Az állatokat harminc perc múlva a nyak elmozdításával leöljük. A befecskendezett leukotrién által előidézett véredény-permeabilitás fokozódást az jelzi, hogy az Evans-kék színezék láthatóan az egyes leukotrién befecskendezési területek közvetlen közelébe vándorol át. A hatás mennyiségi meghatározása céljából a kísérleti állatok hátáról a bőrt sebészeti úton eltávolítjuk az egyes kékszínezék foltok (bőrhólyagok) hoszszú és rövid tengelyét standard metrikus finombeállító tolómérce segítségével megmérjük és a kapott mérési eredményekből az átlagos átmérőt kiszámítjuk. Az eredményeket az 1. ábrán tüntetjük fel. Az egyes pontok az átlagos átmérőt ± átlagos szórást jelentik, három- három tengeri malacon vagy patkányon kapott mérési adatok alapján, állatonként négy 4 leukotrién befecskendezést alkalmazva (összesen 12 megfigyelés). Az 1. ábrából látható, hogy a leukotrién befecskendezése a véredény-permeabilitás dózistól függő növekedését idézi elő, amelyet az tükröz, hogy a színezék a véredényeken keresztül a leukotrién-injekciók befecskendezésének körzetébe vándorol, tengeri malacon és patkányon egyaránt. b) Leukotrién (LTD4) és inhibitorok (egyetlen koncentráció, az idő változása) Racém6-acetil-7-[5-(4-acetil-3-hidroxi-2-propil-fenoxi)-pentiloxi]-3,4-dihidro-2H-l-benzopirán-2- -karbonsav - (I) általános képletű hatóanyag - leukotrién intradermális befecskendezése által előidézett véredény-permeabilitás növekedésre kifejtett gátló hatását határozzuk meg. A tesztvegyületet az előzőekben megadott számú állatra juttatjuk be oly módon, hogy közvetlenül a bőrfelületre egy csepp (50 pl) 10%-os dimetil-szulfoxidos hatóanyag-oldatot cseppentünk. Ez 5 mg hatóanyag/felviteli helymennyiségnek felel meg. A tesztvegyületet a 2. és 3. ábrán feltüntetett időközökben adagoljuk, majd leukotriént (LTD^ intradermálisan fecskendezünk a helyileg előkezelt bőrfelületre, 0,05 ml nátrium-kloridos oldat segítségével, amely ml-enként 8 pg leukotriént tartalmaz és ez 0,4 pg leukotrién/fecskendezési helyértéknek felel meg. Ezután minden állatba 0,5%-os nátrium-kloridos Evans-blue színezékoldatot fecskendezünk, az a) bekezdésben ismertetett módon. Az állatokat 30 perc múlva leöljük, a háton levő bőrt eltávolítjuk és a szinezékvándorlás mértékét a fentiek szerint meghatározzuk. A tesztvegyület hatékonyságát a leukotrién által előidézett permeabilitás gátlásának százalékos nagyságával, az alábbi egyenlet segítségével fejezzük ki: „ tesztvegyülettel kezelt ÁBN - kontroll ÁBN ,nn %-OS gátlás-----------------korall ABN-----------------100 ÁBN-átlagos bőrhólyag-nagyság A tesztvegyület által kifejtett százalékos gátlás az idő függvényében a 2. ábrán (tengeri malac) és a 3. ábrán (patkány) tüntetjük fel. A 2. és 3. ábrából látható, hogy a tesztvegyületek a leukotrién által előidézett véredény-permeabilitást gátolják; a gátlás maximális nagysága tengeri malacon 2-4 óra múlva, míg patkányon valamivel később következik be. c) LTD4 és inhibitorok (koncentrációs változása) A b) bekezdés szerinti eljárást azzal a változtatással ismételjük meg, hogy a tesztvegyületet helyileg, a leukotrién befecskendezése előtt négy órával alkalmazzuk. A tesztvegyület koncentrációját és a kapott eredményeket az 1. és 2. táblázatban adjuk meg. Az eredményekből kitűnik, hogy a tesztvegyület a leukotrién által előidézett véredény-permeabilitás növekedést dózistól függően gátolja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 I 60S I
