203373. lajstromszámú szabadalom • Eljárás HIV-ellenes aktivitással rendelkező heparin előállítására

5

HU 203 373 B

6

Aminosav

3-betűs rövidítés

1-betűs rövidítés

Valin

Val

V

(Asn+Asp)

Asx

B

(GhwGlu)

Glx

Z

Az (I) képletű RP135 pepiid kovalensen kötődik, a szokott módon eljárva, egy kromatográfiás gyantához. A gyantához kötött RP135 pepiidet pedig a szokásos

módon használjuk fel, affínitáskromatográfiával, a HIV- ellenes heparin elkülönítésére. Ezzel kapcsolatban pl. a következő közimsert művekre hivatkozunk:

- C. R. Lowe és R G. D. Dean: Affinity Chromatog- 5 raphy, J. Wiley and Sons, Inc., New York, 1974 és- W. H. Southern Affinity Chromatography, J. Wiley and Sons, Inc., New York, 1981.

HIV izolátum

RP135 szekvencia variáns

IIWBH10)

N

N

T

R

K

S I

R I

Q

R G P

G

R

A

F

V

T

I

G

K

I

G

mB(BH8)

RF

s

—

T

K - -—

—

V

I

Y

A

T_£L

IMN

Y

_

K

—

—

—

—

H

I - -—

—

—

—

YT

K

N

1-SC

_

_

T

R

s

_

H

I

Y

A

TD

I

—

WMJ-2

—

—

V

_

R

s

L

S

I - -R

—

R

E

ILAV-MAL

_

_

_

R

G

_

H

F - -—

Q

—

L

Y

—

T

—

I

V

SF-2

S

_

Y

I - -—

_

—

H

—

T

—

R

INY5

_

_

_

K

G

—

A

I - -—

T

L

Y

A

R

E

—

I

—

Z3

SDKKIJ2_

SR

I - -K

VY

A

KG

I

T

A gyantának oldhatatlannak kell lennie az alkalmazott oldószerekben és pufferekben; mechanikusan és kémiailag stabilnak kell lennie; jó áramlási tulajdonságokkal kell rendelkeznie; könnyen kapcsolhatónak kell lennie az (I) képletű pepiidhez; és nagy felülettel kell rendelkeznie, amely hozzáférhető az abszorbeálandó szubsztrát számára. A megfelelő gyantákra példák a következők:- agaróz, üveg, cellulóz stb. és- kétkomponensű keverékek vagy kémiailag módosítottmátrixok, pl. agarózzal bevont poliakrilamid, poliakril-gyantával bevont vas-részecskék, glicidoxigyantával bevont üveg stb.

Vízoldhatatlan gyanták pl. azok, amelyek hidroxi-, amino- vagy karboxil-csoportokat vagy halogénatomokat tartalmaznak.

A hidroxi-csoportot tartalmazó vízoldhatatlan gyantákra példák a következők:- poliszacharidok (pl. cellulóz, agaróz, térhálós dextrán stb.),- hidroxi-alkil-polisztirol-gyanták (pl. hidroxi-alkilezett sztirol-divinil-benzol kopolimer stb.),- polivinil-alkoholok stb.

Az amino-csoportot tartalmazó vízoldhatatlan gyantákra példák a következők:- amino-alkil-poliszacharidok (pl. amino-alkil-cellulóz, így amino-etil-cellulóz vagy amino-hexil-cellulóz; amino-alkil-agaróz, így amino-hexil-agaróz stb.),

- p-amino-benzil-poliszacharidok (pl. p-amino-benzil-cellulóz, p-amino-benzil-agaróz stb.),

kitozán,

- amino-alkil-poliszürol gyanták (pl. amino-alkilezctt stirol-divinil-fcenzol-kopolimer),- poliakril-amidok és amino-alkil-poliakril-amidok (pl. amino-etil-poliakrilamid stb.) és

- porózus amino-alkil-íivegek (pl. porózus amino-propil-üveg stb.).

Példák a karboxil-csoportot tartalmazó vízoldhatatlan gyantákra a következik:- karboxi-alkil-poliszacharidok (pl. karboxi-alkil-agaróz, így karboxi-hexil-agaróz vagy karboxi-pentil-agaróz; karboxi-alkil-cellulóz, így karboxi-metil-cellulóz, karboxi-alkil-térhálós dextrán, így karboximetil-térhálós dextrán stb.),- karboxi-alkil-poüakril-amidok (pl. karboxi-metil-poliakril-amid stb.) és

- karbonsav-gyanták (pl. akrilsav-divinil-benzol kopolimer stb.).

Példák a halogénatomot tartalmazó vízoldhatatlan gyantákra a következők:- halogén-alkil-polistirol-gyanták (pl. ldórmetilezett stirol-divinil-benzol kopolimer).

Ha halogén-alkil-polistirolt alkalmazunk, ez kívánt esetben egy aktívabb alakká alakítható át. Egy halogén-alkil-polistirol gyanta pl. dialkil-szulfiddal végzett reagáltatással dialkil-tio-alkil-polistirol gyantává alakítható át, amelynek aktivitása magasabb a halogén-alkil-polistirol gyantáénál.

Ha a gyanta egy hidroxil-csoportot tartalmaz, aktiválható pl. a következőkkel:

- cianogén halogeniddel (pl. brómcián),- monoepoxiddal (pl. epiklór-hidrin),- bioxiránnal (pl. l,4-bisz(2,3-epoxi-propoxi)-bután),

- halogén-acetil-halogeniddel (pl. klór-acetil-klorid), majd a kapott aktivált gyantát az (I) képletű peptiddel reagáltatjuk, vagy az (I) képletű pepddben jelenlévő szerint vagy treonin maradék szabad hidroxi-csoportjával reagáltatjuk.

Ha a gyantában egy amino-csoport van jelen, a következőképpen aktiválható:

(1) egy alifás dialdehiddel (pl. glutár-aldehiddel); az aktivált gyantát ezután az (I) képletű peptiddel reagáltatjuk, majd a kapott Schiff-házist egy redukálószerrel (pl. nátrium-bórhidriddel) redukáljuk, vagy

30

35

40

45

50

,55

60

65

4