203372. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hyaluronsav asszociátumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint kozmetikai készítmények
3 HU 203 372 B 4 ekvivalens mennyiségű cink, a teljes nátriumion koncentrációt szabaddá teszi, egyértelműen bizonyítva a cinkionoknak a nátriuménál erősebb kötődését a hyaluronáthoz. Ezzel kísérletileg megcáfoltuk azt a korábbi állítást, amely szerint a hyaluronsav cinkionok megkötésére nem képes (Parrish, R. F., Fair, W. R.: Biochem. 1.193,407-410,1981). Megállapításunkkal tehát a szakemberek eddigi ismeretét döntöttük meg. Fenti vizsgálatainkból kitűnt az is, hogy vizes oldatban a nátrium-hyaluronát és cinkionok (cink-klorid) ekvivalens mennyiségének egymásra Itatása útján sztöchiometrikus összetételű cink-hyaluronát asszociátum képződik. Az így előállított, megfelelően izotonizált oldat gyógyászati célra közvetlenül használható. Nincs szükség a cinkvegyület külön folyamatban szilárd állapotban történő előállítására. Analóg eredményre vezettek a kobalt ionnal és más 3d-fémionokkal végzett elővizsgálatok is. Jellemzés céljából a komplexet szilárd állapotban mégis előállítottuk és EXAFS (Extended X-ray Absorption Fine Structure) módszerrel meghatároztuk a cinkion közvetlen környezetének összetételét. Megállapítottuk, hogy a cinket négy oxigénatom veszi körül az első koordinációs szférában. A Zn-O kötéstávolságok értéke 199 pm. A cinktől távolabb 241 pm-re két szénatom helyezkedik el. Vizsgálataink szerint a cink-hyaluronát az analóg rézkomplextől szignifikánsan különbözik. Utóbbi négy ekvatoriális és két axiális Cu-O kötést tartalmaz, melyek értéke 194, illetve 234 pm. A réz és a legközelebbi két szénatom közötti távolság 258 pm. A kobaltkomplex nem a rézkomplexhez, hanem a cinkkomplexhez hasonló szerkezetet mutat A találmányunk eljárás a deprotonált hyaluronsavnak a periódikus rendszer 4. periódusába tartozó 3d-fém-ionokkal képezett asszociátumai (komplexei) előállítására. A találmányunk tárgya továbbá kozmetikai készítmény, valamint eljárás gyógyszerkészítmény előállítására amely hordozóanyagként vagy hatóanyagként a deprotonált hyaluronsavnak a periódusos rendszer 4. periódusába tartozó 3d-fémionokkal képzett asszociátumát (komplexét) tartalmazza kívánt esetben egyéb hatóanyagok) és/vagy segédanyag(ok) mellett. A találmányunk szerinti új asszociátumokat (komplexeket) oly módon állítjuk elő, hogy a) a nátrium-hyaluronát vagy egyéb hyaluronát tartalmú só (alkáli-, alkáliföldfém, adott esetben ezüstsó) vizes oldatához ekvivalens mennyiségben a periódusos rendszer 4. periódusába tartozó 3d-fémionok egyikének sóját, előnyösen kloridját tartalmazó vizes oldatot adunk, vagy b) a hyaluronsav egy kvatemer-ammónium sóval képzett új asszociátumát vizes szuszpenzióban egy, a periódusos rendszer 4. periódusa 3d-fémionjának vizes oldatát és egy vízzel korlátoltan elegyedő szerves oldószert, előnyösen n-butanolt tartalmazó oldószerpárban feloldjuk, majd a kapott hyaluronsavnak a periódusos rendszer 4. periódusa 3d-fémionjával képzett asszociátumát (komplexét) ismert módon- egy alkanollal vagy egy alkanonnal kicsapjuk,- a csapadékot az oldatból kinyerjük, kívánt esetben ezt követően- kíméletes körülmények között megszárítjuk. . A fentiek alapján eljárást dolgoztunk ki hatóanyagként cink-hyaluronát asszociátumokat (komplexeket), illetve más, aperiódusosrendszer4. periódusába tartozó 3d-fémionok analóg asszociátumait tartalmazó vizes oldatok előállítására. Az oldatokat minden esetben a fémion és a hyaluronát komponensek közvetlen reagáltatásával állítottuk elő. Ezzel az előállítási móddal nevezett hatóanyagok előzetesen szilárd állapotban történő kipreparálása szükségtelenné vált A módszerünkkel előállított oldatban már ekvivalens cinkmennyiség jelenlétében is csak elhanyagolható mennyiségű a szabad (fémhez nem kötött) hyaluronát. Cinkion felesleg hatására a cink-hyaluronát asszociátum (komplex) képződés teljesen kvantitatívvá válik. A fémasszociátumok a fenti módon történő előállítása során az oldatok kémhatása pH = 5 körüli értékre áll be. A 0,2 m/v%-os hyaluronát-oldat esetén a pH eléri az 5,4 értéket, míg 0,5 m/v%-os koncentráció esetén pH = 5. Szükség esetén néhány csepp izotóniás nátrium-acetátoldattal utóbbi rendszer kémhatása pH 5,5-5,6-ra beállítható. Az előzőek szerint ismertetett eljárással kétféle cinkhyaluronát hatóanyagú oldatot készítettünk el: 1. Cink-klorid felesleggel izotonizált cink-hyaluronát oldatok Figyelembe véve, hogy a szabad cink-klorid maga is előnyösen használható a bőrgyógyászatban, a cink-hyaluronát-oldat ozmózis nyomását cink-klorid felesleggel állítottuk be az izotóniás értékre. Az így előállított oldat szabad (cinkhez nem kötődő) hyaluronátot egyáltalán nem tartalmaz, viszont a-cink-hyaluronát mellett cink-klorid felesleg van a rendszerben. 2. Egy monoszachariddal vagy egy cukoralkohollal izotonizált cink-hyaluronát-oldatok Olyan gyógyászati felhasználásra, amelynél a hyaluronáthoz nem kötött cinkionok jelenléte nem indokolt, a hyaluronáttal egyenértékű cinkion mennyiséget tartalmazó oldatot polialkohollal (cukoralkohollal, előnyösen szorbittal), vagy mono-, illetve diszachariddal (előnyösen glükózzal) izotonizáltuk. Ez utóbbi rendszerek szabad cinkion- és szabad hyaluronáttartalma nem éri el az össz-cink-, ill. össz-hyaluronát tartalom 5%-ák A találmány szerinti asszociátumok alkalmazása során igény lehet olyan készítményekre is, amelyek ionmentesek. Az előzőekben leírt - találmányunk szerinti - eljárás során előállított asszociátumok ugyanis rendszerint nátriumkloridot vagy egyéb sót tartalmaznak, amely a kiinduláshoz használt hyaluronát kationjából és 3d-fémsó anionjából képződik. Sómentes, 3d-fémionnal képzett hyaluronsav asszociátumot két egymástól eltérő eljárásváltozattal állíthatunk elő: a) egy ismert hyaluronát oldathoz, előnyösen nátrium-hyaluronát oldathoz egy kvatemer-ammónium só oldatát adagoljuk. A csapadék formájában kivált, új hyaluronsav-kvaterner-ammónium asszociátumot kellő tisztítást követően egy, a periódusos rendszer 4. oszlopába tartozó 3d-fémionjának vizes oldatából és egy vízzel korlátoltan elegyedő oldószerből, előnyösen n-butanolból álló oldószerpárban erőteljes keverés mellett feloldjuk. A két fázist elválni hagyjuk, majd a vizes fázisból a hyaluronát asszociátumát alkanollal vagy al-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
