203371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új inzulin-származékok és az azokat tartalmazó injekciós oldatok előállítására
3 HU 203 371 B 4 A humán inzulinhoz képest a molekulában jelenlevő töltések számát oly módon változtatjuk meg, hogy a humán inzulinban szereplő aminosavak közül az egyik vagy több helyére más aminosavat építünk be, és kívánt esetben a B30-helyzetű aminosav karboxilcsoportját védjük. A jelen találmány szerinti, gyakorlati szempontból lényeges vegyületeket különösen az alábbiakkal jellemezhetjük: Az A17- és B 13-helyzetűkét glutaminsav közül egyet vagy többet glutaminnal helyettesítünk; és/vagy a B27- helyzetű treonin helyére L-arginint vagy L-lizint építünk be; és/vagy a B30-helyzetű treonin helyére lizint, a B-lánc C-terminálisán levő karboxilcsoportot amidálhatjuk, és az A21 -helyzetű aszparagint valamely más L-aminosavval helyettesíthetjük. A találmány tárgya továbbá eljárás az alábbi (I) általános képlett! vegyületek oldatai előállítására, amely oldatok adott esetben tartalmazhatnak meghatározott mennyiségű cink-iont. A cink-ionok mennyisége szabja meg, milyen mértékben fejt ki e készítmény nyújtott inzulin-hatást Az (I) általános képletben E1 jelentése Glu, E2 Glu vagy Gin, E3 Glu vagy Gin, E4 Glu, Arg vagy His, X jelentése Thr, Arg vagy Lys, Y jelentése Thr vagy Lys, R jelentése hidroxilcsoport vagy NH2 csoport, és W jelentése Asn, His, Asp, Gly, Arg, Ser vagy Thr, azzal a megkötéssel, hogy ha W jelentése Asn, akkor R jelentése hidroxilcsoport; és ha W jelentése Asn, X és Y jelentése Thr, és ugyanakkor E3 jelentése Gin, akkor E2 Gin, továbbá azzal a megkötéssel, hogy az E1, E2, E\ E\ W és X helyén szereplő hat aminosav közül legalább az egyik eltér a humán inzulin megfelelő helyén szereplő aminosavtól. Az E1, E2, E3, E\ W, X, Y és Z helyén szereplő nyolc aminosav közül legalább az egyiket továbbá az R csoportot úgy választjuk meg, hogy az (I) általános képletű vegyületben pH = 7-nél a humán inzulinhoz képest legalább eggyel több töltés legyen jelen. Miután az (I) általános képletű vegyületeket a klinikai gyakorlatban nyújtott hatású oldatokként használhatjuk, előfordulhat, hogy e készítmény kevésbé lesz immunogén, mint a sertés vagy humán inzulin szokásosan alkalmazott szuszpenziói. A hatás megnyújtásának mértékét cink-ionok hozzáadásával megnövelhetjük, illetve szabályozhatjuk. Az inzulin-hatás megnyújtásának mértékét szabályozó fő paraméterek a következők: a cink koncentrációja, és az adott (I) általános képletű vegyület anyagi minősége. Az előnyös cink-tartalom 0 mg/ml és körülbelül 2 mg/ml között, és előnyösen 0 |tg/ml és 200 pg/ml között van, abban az esetben, ha az (I) általános képletű vegyület a B13- és/vagy B27-helyzetben van módosítva, illetve a cink-tartalom előnyösen körülbelül 20 |ig/ml és 200 pg/ml között van a további (I) általános képletű analógok esetében, mindez olyan készítményekre érvényes, amelyek ml-enként 240 nmól (I) általános képletű vegyületet tartalmaznak. Ha az (I) általános képletű vegyület koncentrációja ettől eltérő, akkor a cink-tartalmat ennek megfelelően kell beállítani. Az (I) általános képletű vegyületek oldatainak cink-ionok jelenlétében megfigyelhető nyújtott hatását az ilyen vegyületeknek semleges pH-n megnyilvánuló kis oldhatóságának tulajdoníthatjuk. A jelen találmány szerinti injekciós oldat pH-jának előnyösen a fiziológiai (az élő szervezetben uralkodó) pH alatt kell lennie, a pH-tartomány felső határa az a pH, ahol az oldott anyag kicsapódik az oldatból/ A fiziológiai pH-értéknél a jelen találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek oldhatósága kicsi. pH = körülbelül 5,5-nél stabil oldatokat lehet előállítani az (I) általános képletű vegyietekből olyan koncentrációban, ahol az oldat körülbelül 240 nmól (I) általános képletű vegyületet tartalmaz ml-enként. A koncentráció felső határa az oldatban levő egyéb összetevők, vagyis az ozmózisnyomás beállítására szolgáló szerek, konzerválószerek és a cink koncentrációjától függ, továbbá attól, hogy melyik (I) általános képletű vegyületet használjuk. Az oldatoknak nincs alsó pH-határa, és a W helyén aszparagintól eltérő csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek stabilitása még pH = 3-nál is nagy. A jelen találmány szerinti injektálható oldatok előnyös pH-tartománya körülbelül 2,5 és 8,5 között, és előnyösebben körülbelül 4,5 és 8,0 között van. Különösen előnyösek a körülbelül 2,5 és 5,5 közötti pH-tartományok, és legelőnyösebbek a körülbelül 3 és 4,5 közötti pH-tartományok. A találmány szerinti készítmények egy további lényeges vonása, hogy többféle módon alkalmazhatjuk írét egy adott beteg esetében. Ha két vizes oldatot alkalmazunk, amelyek közül az egyik az (I) általános képletű vegyületet tartalmazza, és a másikban a cink-só van jelen, akkor maga a beteg beállíthatja a nyújtott hatás mértékét és egy kívánt hatásprofilt, egyszerűen oly módon, hogy a két oldatot összekeveri. így, a két töizsoldat birtokában a betegnek megvan a lehetősége, hogy megválasszon a reggeli injekcióhoz egy bizonyos fajta hatást, és egy másfajta hatást az esti injekcióhoz. A jelen találmány szerinti, cink-sót tartalmazó oldat előnyösen körülbelül 2 pg és 20 mg cinket tartalmaz ml-enként. Egy másik megoldás szerint mindkét törzsoldat tartalmazhat cinket, vagy ugyanabban, vagy eltérő koncentrációban, és/vagy mindkét törzsoldat tartalmazhat valamely (I) általános képletű vegyületet, mégpedig vagy ugyanazt a vegyületet, vagy egymástól eltérő vegyületeket. A jelen találmány szerinti injekciós oldatokban az (I) általános képletű vegyületek koncentrációja előnyösen ml-enként körülbelül 60 nmól és 6000 nmól között van. Abban az esetben, ha W jelentése L-aszparagintól eltérő, akkor W helyén szerepelhet valamely semleges L-aminosav, így glicin, szerin vagy treonin, W jelentése lehet valamely savas aminosav, előnyösen aszparaginsav, vagy pedig valamely bázikus aminosav, például arginin vagy előnyösen hisztidin. A találmány szerinti készítmények egyik előnyös csoportjában olyan (I) általános képletű vegyületek vannak jelen, ahol E1, E2, E3 és/vagy E4 jelentése glutamin, és/vagy X jelentése lizin vagy arginin, és W jelentése glicin, szerin, treonin, alanin, hisztidin vagy aszparaginsav. Az (I) általános képletű előnyös vegyületek egyik csoportjában E2 és E3 jelentése glutamin. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
