203370. lajstromszámú szabadalom • Eljárás főleg nátriuretikus és diuretikus hatású peptidek és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203370B dőcsoportnál metilén-kloridban trifluor-ecetsawal vagyFmoc-védőcsoportoknáldimetil-formamiddal 20%-os piperidin oldattal lehasítottuk, a következő védett aminosavakat egymás után a kívánt sorrendben kapcsoljuk. A közbenső termékként keletkező N-terminálison védett peptidgyantákat a következő aminosavszármazék kapcsolása előtt az előre meghatározott reagensekkel szabaddá tesszük. Kapcsoló reagensként az összes peptidszintézisben általánosan alkalmazott aktiváló reagenseket felhasználhatjuk (Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, 15/2. kötet). Különösen alkalmasak azonban a karbodiimidek, így például az N,N’-diciklohexil-karbodiimid, N,N’-diizopropü-karbodiimidvagyazN-etil-N’-(3- dimetil-amino-propil)-karbodiimid. A kapcsolást úgy is elvégezhetjük, hogy az aminosav származékot az aktiváló reagenssel közvetlenül addícionáltatjuk, és adott esetben a gyantához adunk egy racemizálást megakadályozó anyagot, így például 1-hidroxibenzotriazolt (HOBt) (W. König, R. Geiger, Chem. Bér. 103,708 /1970/) vagy az aminosav származék előaktiválását külön elvégezhető szimmetrikus anhidridként vagy HOBt illetve HOObt-észterként és az aktivált anyagnak egy megfelelő oldószerben készített oldatát a kapcsolásra kész peptidgyantához adjuk. Az aminosav-származéknak az egyik korábban említett aktiváló reagenssel történő kapcsolódását ületve aktiválását elvégezhetjük dimetil-formamidban vagy metilén-kloridban, vagy ezek elegyében. Az aktivált aminosav-származékot szokásos módon 1,5-4-szeres feleslegben alkalmazzuk. Abban az esetben, ha nem teljes a kapcsolódás, akkor a kapcsolódási reakciót megismételjük anélkül, hogy a következő aminosav kapcsolódásához szükséges peptidgyanta a-aminocsoportját szabaddá tennénk. A kapcsolódási reakció sikeres lezajlását ninhidrin reakcióval ellenőrizhetjük (E. Kaise és mtársai Anal. Biochem. 34 595 /1970/). A szintézist automatizálhatjuk is, így például egy peptid szintetizáló berendezéssel (Peptid-Synthesizer Modell 430A; Applied Biosystems termék), amikoris vagy a készülék gyártó által megadott szintézis programot vagy a használó által kidolgozott programot alkalmazzuk. Ez utóbbi esetben különösen azFmoc-csoportokkal védett aminosavszármazékokat alkalmazzuk. Az előzőekben leírt módon zajló peptid szintézisnél a peptidet a gyantáról reagensekkel, így például folyékony hidrogén-fluoriddal (különösen Bocmódszerrel előállított peptideknél előnyös) vagy trifluor-ecetsawal (különösen Fmoc-módszerrel szintetizált peptideknél előnyös) lehasítjuk. Ezek a reagensek nemcsak a peptidet hasítják le a gyantáról, hanem az aminosav származék egyéb oldalláncon lévő védőcsoportjait is. íly módon BHA- és MBHA-gyanták esetében a peptidet szabad savként kapjuk. BHA- Ületve MBHA-gyanták alkalmazásakor hidrogén-fluoriddal vagy trifluor-metánszulfonsawal végzett hasításnál a peptidet savamid formájában kapjuk. Peptidamidok előállítására egyéb eljárást ismertet a 37 11 866.8. és 37 43 620.1. számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi le3 írás. Itt a peptidamidot a gyantáról a peptid szintézisben szokásosan alkalmazott közepesen erős savakkal hasítjuk le, így például trifluor-ecetsawal, amikoris kation-forgó anyagokat, így például fenolt, krezolt, tiokrezolt, anizolt, tioanizolt, etán-ditiolt, dimetil-szulfidot, etü-metü-szulfidot vagy egyéb, a szilárdfázisú szintézisben szokásosan alkalmazott kationfogó anyagot egyedül önmagában, vagy ezekből kettőt vagy többet összekeverve adagolunk. Ekkor a trifluor-ecetsavat megfelelő oldószerben, így például metilén-kloridban hígítva alkalmazhatjuk. Ha a hasítást hidrogén-fluoriddal, trifluor-metánszulfonsawal és trifluor-ecetsawal végezzük, akkor kationfogó anyagként alkalmazhatunk fenolt, krezolt, tiokrezolt, tioanizolt, dimetü-szulfidot, etil-metU-szulfidot vagy ezekből kettőt vagy többet összekeverve. Ekkor a trifluor-ecetsavat megfelelő oldószerben, így például metilén-kloridban hígítva adagoljuk. Ha a peptid terc-butil illetve benzil-oldallánci védőcsoportját meg akarjuk tartani, akkor egy módosított vivőgyantán szintetizált peptid lehasítását metilén-kloridban oldott 1%-os trifluor-ecetsawal végezzük, mint ahogy azt R.C. Sheppard (J. Chem. Soc., Chem. Comm. 1982,587. oldalon) leírja. Ha az egyes terc-butil illetve benzil oldallánci védőcsoportokat meg akarjuk tartani, akkor a szintézis és lehasítási módszer megfelelő kombinációját kell alkalmazni. A C-terminálison amidcsoportot vagy w-amnoilletve (jo-guanidino-alkil-csoportot tartalmazó peptidek szintézisekor ugyancsak Sheppard által leírt módosított vivőgyantát alkalmazzuk. A szintézisben a gyantáról lehasítják az oldalláncon teljesen védett peptidet, majd hagyományos oldási szintézissel megfelelő amin illetve w-amino-alkil-amin vagy co-guanidino-alkü-aminná reagáltatják, amikoris adott esetben jelenlévő egyéb funkcionális csoportokat ismert módon időlegesen védik. Egy w-amino-alkil-csoportot tartalmazó peptid előállítási eljárását ismerteti a 36 35 670.0. számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi bejelentés. A találmány szerinti eljárással kapott peptideket előnyösen szilárd fázisú módszerrel két általános védőcsoport felhasználásával szintetizáljuk; A szintézist egy modern 4300-as automatikus peptidszintetizálóval végezzük (Applied Biosystems termék), amikoris az a-aminocsoport átmeneti blokkolásához Boc- illetve Fmoc-védőcsoportot alkalmazunk. Ha a Boc-védőcsoportot alkalmazzuk, a készülék gyártója által előre programozott szintézis ciklusokat alkalmazzuk az eljárásban. A C-terminálison szabad karboxilcsoportot tartalmazó peptidek szintézisét megfelelő Boc-aminosawal funkcionalizált 4-(hidroxi-metü)-fenU-acetamido-metil-polisztirol gyantán végezzük (R.B. Merrifield, J. org. Chem. 43,2845/1978/). Agyanta Applied Biosystems termék. Peptidamidok előállításához ugyanennek a cégnek MBHA-gyantáját alkalmazzuk. Aktivizáló reagensként N,N’-diciklohexil-karbodiimidet vagy N,N’-diizopropil-karbodiimidet 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
