203354. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, kondenzált tienotriazolo- és tienoimidazolo-diazepinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 354 B 2 A hatóanyagokat mindig 2-3 perccel az aggregáció kiváltása előtt adtuk a TRP-hez, 10 pl-es térfogatban. Oldószerként desztillált viz, etanol és/vagy dimetilszulfoxid szolgált. A kontrollminták a megfelelő térfogatú oldószert tartalmazták. A kimeneti abszopció regisztrálása után (2-3 perc) indukáltuk az aggregációt a PAF-fal (5*10-* M). A vegyületek hatásának megítélésére az első aggregációs hullám maximumát használtuk fel. A PAF által indukált maximális abszorpciós hányadot (maximális aggregáció • 100%) kétcsatornás készülékben mindig egyidejűleg határoztuk meg a vizsgált mintához képest, és ezt mint 100%-os értéket használtuk (a kétcsatornás készülékben az egyik csatorna a kontrolimintáé, a másik a vizsgált mintáé volt). A vizsgált vegyület befolyása közben elért aggregációs értéket mint 100%-ot adtuk meg. Minden vizsgált vegyületet 10-3—10"8 M koncentrációban, szúrópróbaszerűen vett 4 párhuzamos mintában vizsgáltunk a PAF által indukált vérlemezke-aggregációra kifejtett gátló hatásra nézve. Ezután 3 koncentrációhoz tartozó érték alapján felvettük a koncentráció-hatásgörbét, és ebből meghatároztuk az IKjo értékeket (az 50%-os aggregációgátláshoz tartozó koncentráció). Egyes vegyületeknél csupán tájékoztató vizsgálatokat végeztünk. A 176 927 számú európai szabadalmi leírásból ismert a 6-(2-klór-fenil)-ll- metil-2,3,4,5-tetrahidro-8H- ciklohexa[4,5]-tieno[3,2-f][l,2,4]triazolo[4,3-a][l,4] diazepinnek (A vegyület) és a 6-(2- klór-fenil)-ll-metil-2,3,4,5-tetrahidro-8H-pirido[4\3’:4,5]tieno[3,2-f] [l,2,4]triazolo[4,3-a][l,4]diazepinnek (B vegyület) a PAF-antagonista hatása. Ennél a két vegyületnél az IK» értékek: A<2,5, illetve B<10. Mindkét vegyület a pH] Flunitrazepammal, mint radioligandummal végzett benzoidazepin-receptorkötődési vizsgálatban (Bechtel és társai, Arzneimittelforschung 3a, 1986, 534) 21 (A), illetve 35 (B) értéket (10-9 mól) adott, ami ezeknek a vegyieteknek központi hatására utal. Meglepő módon azt találtuk, hogy némely (la) általános képletű találmány szerinti vegyület a Flunitrazepam-kötődési vizsgálatban lényegesen nagyobb értéket ad, de a központi idegrendszerre nincs hatása. A következő táblázatban néhány ismert, illetve néhány a találmány szerinti vegyület PAF-értéke, valamint a Flunitrazepam kötődési vizsgálatban adott értéke van felsorolva: A. táblázat Vegyület IK» érték PAF 10* mól Km érték FNB Hk» mól Alprazolam 14 5,5 Triazolam 9 1,4 A vegyület <2,5 21 B vegyület <7 35 1. példa 0.5 >5000 2. példa 2,5 >5000 Vegyület IK» érték PAF 10* mól IKjo érték FNB 10-» mól 10. példa 0,3 3600 11. példa 0,5 5000 17. példa 1,8 1070 18. példa 1,3-19. példa 0,6-21. példa 0,3 >5000 25. példa 1 2300 33. példa 2,3-35. példa 3,3 >5000 36. példa 0,4 >5000 37. példa 1,8 >5000 38. példa 2,7-44. példa 4,8 1460 56. példa 0,4 380 60. példa 0,4 4600 61. példa 0,4 >5000 62. példa 0,8-66. példa 0,4-77. példa 2,2 4800 81. példa 0,9-84. példa 1 >5000 64. példa <0,2 920 109. példa <0,2 3000 2. In vivo vizsgálatok . 2.1. A PAF által kiváltott hörgőszűkület antagoniz? turnusának vizsgálata narkotizált tengerimalacokon Spontán lélegző, 300-450 g súlyú hím tengerimalacokat az i.v. adott PAF-infűzió (30 ng/kg perc) előtt egy órával orálisan kezeltünk a vizsgált vegyülettel vagy a kontroll vehiculummal, A kísérleti állatokat ezután 2 mg/kg i.p. dózisú metánnal elaltattuk, majd a Vena jugularisba, az Artéria carotisba és a légcsőbe kanülöket vezettünk. A kontrollállatokon a PAF-infuzió erős, tartós hörgőszűkületet okozott, amit a légzéshez felhasznált levegő térfogata és a légzési ellenállás alapján mértünk, valamint vérnyomás-esést okozott. 7-10 perc múlva a kontrollállatok elpusztultak. A leírt PAF-antagonista hatású vegyietekkel ezeket a légzésre és a vérnyomásra kifejtett effektusokat, valamint az állatok elhullását gátolni lehetett.-át 2.2. A PAF által kiváltott vérnyomás-csökkmés antagonizmusának vizsgálata narkotizált patkányokon Normális vémyomású, 200-250 g súlyú hím Wistar-patkányokat 2 mg/kg i.p. dózisú metánnal elaltattunk. Az Artéria carotisba és a Vena jugularisba kanülöket vezettünk. A kontrollállatokon az i.v. adott PAF- infúzió (30 ng/kg perc) erős és tartós vérnyomás-esést okozott. Ezt a hatást a leírt hatóanyagok intravénás injekciójával (kumulatív adagolás) dózisfüggően meg lehetett szüntetni. A fenti PAF-infúzió által kiváltott vérnyomás-csökkentő hatást a PAF-infűzió előtt orálisan vagy intravénása adott hatóanyag dózisíÉggően tudta akadályozni.-ás-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
