203278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liposzóma készítmények előállítására
HU 203278B 37. példa A 19. példában leírtak szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 500 pg CDDP-t alkalmazunk. A liposzóma 4,9% CDDP-t tartalmaz. 38. példa A 20. példában leírtak szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 500 pg CDDP-t alkalmazunk. A liposzóma 7% CDDP-t tartalmaz. 2-1 kísérlet A 21., 28., 29., 33. és 35. példák szerint eljárva kontroll készítményeket állítottunk elő anionos felületaktívanyag nélkül. 2-2. kísérlet A 6-CF vérszintet és a CDDP-szintet hasonlítottuk össze az 1. példa, illetve a 15. példa szerinti készítmények patkányoknak való intravénás adagolás a után 6 órával és a kapott eredményeket a 4. ábrán ábrázoltuk. Minden időpontban a CDDP szint azonos volt a 6-CF szintjével, mutatva, hogy a CDDP liposzóma készítmény (—.—) azonosan viselkedik a 6-CF liposzóma ksézítménnyel (—x—). A 21., 22., 25., 26. és 29. példák szerinti készítmények ugyancsak a 6-CF liposzóma készítmények magas értékeit mutatják. Ezek az eredmények is bizonyítják, hogy a találmány szerinti eljárással nyert liposzóma készítmények tartózkodási ideje megnövekszik a vérben intravénás adagolás után. A CDDP szint meghatározása a vérben A caudális vénából levett 0,2 ml heparinizált vérhez 2 ml PBS-t adagolunk, majd a kapott szuszpenziót centrifugáljuk és 1 ml felülúszóhoz 1 ml DDTC oldatot adagolunk. A CDDP teljes mennyiségét a vérben az előzőekben leírtakhoz hasonlóan határozzuk meg. 2-3. kísérlet A fentiekben leírtak szerint meghatározzuk a 21. példa szerinti készítmény SMT tartalmát. Megállapítható, hogy a bemért mennyiség 90%-át tartalmazza a liposzóma. Ez az érték jóval magasabb mint a CDDP 23,5%-os megkötött értéke, mutatva, hogy az SMT valószínűleg a liposzóma membrán alkotója, valamint azt, hogy körülbelül 150 molekula SMT van jelen 1000 molekula foszfolipidre számolva a liposzóma membránban. SMT tartalom meghatározása 15 mg metilén-kéket, 6 g koncentrált kénsavat és 25 g vízmentes nátriumszulfátot desztillált vízben oldunk úgy, hogy 500 ml oldatot nyerjünk. Ezen oldatSml-éhezhozzáadunk 10 ml 1000-szeresre hígított liposzóma készítményt és 5 ml kloroformot, majd rázással két fázisra választjuk és mérjük a klorofonnos fázis adszorpcióját. Különböző koncentrációjú SMT oldatokkal (kevesebb mint lOppm) kalibrációs görbét vettünk fel. Vakpróbaként 2-1. példa szerinti SMT-mentes liposzóma készítményt alkalmaztunk. 39. példa A 11. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 13 308 g protein/ml koncentrációjú interleukin-2 oldatot (IL-2) (25 mmólos vizes ammonium acetáttal pH= 6-nál előállítva) alkalmaztunk. 40. példa A 13. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 308 g protein/ml IL-2 oldatot alkalmaztunk. 41. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 100 pg/ml koncentrációjú vizes ansamitocin oldatot alkalmaztunk. 42. példa A 13. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 100 |xg/ml koncentrációjú vizes ansamitocin oldatot alkalmaztunk. 43. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 5 jig/ml koncentrációjú metotrexánt alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 44. példa A 13. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 5 |xg/ml koncentrációjú metotrexánt alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 45. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 200 pg/ml koncentrációjú mitomicin C-t alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 46. példa A 13. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 200 |xg/'ml koncentrációjú mitomicin C-t alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 47. példa A 11. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 1 mg/ml koncentrációjú adriamicin-t alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 48. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 1 mg/ml koncentrációjú adriamicin-t alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 49. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 3 mg/ml koncentrációjú bleomicint alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. 50. példa All. példa szerint járunk el, csak a 6-CF helyett 3 mg/ml koncentrációjú bleomicint alkalmaztunk fiziológiás sóoldatban. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás gyógyászati hatóanyagot — amely oktanol és víz közötti megoszlási koefficiensének logaritmusa 10 vagy ennél kisebb—valamint foszfolipideket tartalmazó liposzóma készítmény előállítása -14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
