203235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új izoxazolszármazékok előállítására
1 HU 203 235 B 2 Emberi T-Lymphocyta-ATH8 sejteket 2 mg/ml Polybren-nel előkezeltünk 30 percen át 37 °C-on. A sejteket ezután lecentrifugáltuk, friss, 13% fötális borjúszérumot, 11% interleukin-2 (tf/tf) 50 pM ßmerkapto-etanolt, 4 mM L-glutamint, 50 E/ml penicillint és 50 mg/ml Streptomycint tartalmazó RPMI 1640 kultúra közegben újra szuszpendáltuk és 2 x 103 vírus egyed/sejttel 60-90 percig 37 °C-on fertőztük. A HTLV-IIIB vírusokat amerikai AIDS betegek csoportjától kaptuk. A túlélt HIV-képző H9 sejtkultúrákból körülbelül 6 x 1010 vírusrészecskét kaptunk mlenként, mint ezt Mitsuya és mások (Proc. Natl. Acad. Sei., USA, 82. köt., 7096-7100 [1985]) leírták. Ez a víruskoncentráció annak a minimális dózisnak 400-szorosa, amely ATH8 sejtekben a sejtpatogenitás indukálásához szükséges, és ezért a fer tőzés után a sej - teket a tenyészközegbe helyeztük vissza, és 2 ml-enként visszatettük a vizsgálati anyagokat tartalmazó, és azokat nem tartalmazó tenyészedényekbe. 37 °C-on, 6-7, illetve 10 napig végzett inkubálás után az élő sejtek számát megszámoltuk és összehasonlítottuk a vizsgált anyag nélküli kontrollal. Mindkét tesztrendszer esetében a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek sokszorosan jobb hatást mutatnak, mint a 211 157 sz. európai szabadalmi bejelentésben szerinti vegyületek A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek a szokásos módon orálisan vagy parenterálisan adagolhatok. Előnyösen orálisan adagoljuk őket, kb. 0,005-10 mg/testtömeg, előnyösen 0,05-0,5 mg/kg testtömeg dózisban. A kezelő orvos azonban - a beteg általános állapotától függően - a megfelelő (I) általános képletű vegyület dózisát és kiszerelési módját másként is előírhatja. Ha a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket vírusos megbetegedések profilaxisára használjuk, akkor a dózisok ugyanolyan keretek között mozognak, mint a kezelés esetében. Az orális adagolás profilaxis esetén is előnyös. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek önmagukban, vagy egyéb, gyógyszerészetüeg hatásos, anyagokkal együtt adagolható, emellett az (I) általános képletű vegyület-tartalom 0,1 és 99% között van. A gyógyszerészetüeg hatásos vegyületeket általában alkalmas, iners segéd-, hordozó- és/vagy hígítószerekkel, például gyógyszerészetüeg ártalmatlan oldószerekkel, zselatinnal, gumiarabikummal, tejcukorral, keményítővel, magnézium-sztearáttal, talkummal, növényi olajokkal, poli-alküénglikolokkal, vazelinnel és hasonlókkal képezett keverék alakjában vannak forgalomban. A gyógyszerkészítmények lehetnek szilárd halmazáüapotúak, például tabletták, drazsék, kúpok, kapszulák és hasonlók, félszüárd alakúak, például kenőcsök vagy folyékony halmazáüapotúak, például oldatok, szuszpenziók, vagy emulziók. Adott esetben e készítmények sterilizáltak, és segédanyagokat, mint konzerváló-, vagy emulgeálószereket, az ozmózisnyomás szabályozására alkalmas sókat, és hasonlókat tartalmazhatnak. A gyógyszerkészítmények a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek egyéb, gyógyszerészetüeg értékes anyagokat, például egyéb, fertőzés eüeni vagy vírus eüeni hatóanyagokat tartalmazhatnak Ezekkel a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek például egyéb, fent nevezett segéd-, hordozó- és/vagy hígítóanyagokkal együtt kombinációs készítményekké receptruálhatók 1. példa 5-{7-[5-azar:(4,5-Dihidro-4,4-dimetü-2-oxazolü)-2-tienü]-oxiheptü}-3-metü-izoxazol 0,85 g (2,2 mól) N-(2-hidroxi-l,l-dimetü-etü)-5- [7-(3-metü-5-izoxazolü)-heptüoxi]-2-tiofénkarbons avamidot 5 ml tionü-kloridba helyezünk és az elegyet még 20 percig keverjük Ezután elővigyázatosan bepároljuk, és a maradékot 20 ml telített nátrium-karbonátoldat és 30 ml etü-acetát elegyével rázzuk ki. A vizes fázist még kétszer, egyenként 30 ml etü-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat nátriumszulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk Kitermelés: 0,7 g barnás színű olaj. A nyersterméket oszlopkromatográfiásan tisztítjuk (Kiesegei 60, oldószer 1:1 arányú etü-acetát/petroléter.) Kitermelés: 320 mg színtelen olaj, amely mélyhűtőszekrényben kikristályosodik (az elméletinek 39,5%a). Az olvadáspont szobahőmérséklet alatt van. ^-NMR (CDC13): delta (ppm) 7,28,7,24; 6,18; 6,13 (AB, 2H, Th-H3, Th-H4); 5,80 (s, 1H, Isox-H*); 4,05 (t, 2H, 0-CH2); 4,05 (s, 2H, Oxaz-CH^; 2,70 (t, 2H, Isox-CH2); 2,25 (s, 3H, Isox-CHj); 1,95-1,16 (m, 1 OH, CH2);U0(s,6H,2CH3). A kiindulási anyagot a következő módon áüítjuk elő: N-(2-Hidroxi-l, 1 -dimetü-etü)-5-[7-(3-metfl-5- izoxazolü)-heptüoxi]-2-tiofénkarbonsavamid 1,0 g (3,1 mmól) 5-[7-(3-metü-5-izoxazolfl)-heptiloxi]-2-tiofénkarbonsavat 10 ml tionü-kloridba keverünk. Ezen a hőmérsékleten a reakcióelegyet tovább keverjük és a tionü-kloridot 30 °C fürdőhőmérsékleten vákuumban ledesztüláljuk A maradékot a tionflklorid nyomoktól vákuumban megszabadítjuk, és 7 ml abszolút metilénkloridban oldjuk Ezt az oldatot 0 és 5 °C hőmérsékleten, keverés közben 0,61 g (6,8 mmól) 2-amino-2-metil-l -propanol 7 ml abszolút metüén-kloriddal készült oldatához csepegtetjük keverés közben. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, és további 1 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet 10 ml 2 n HCl-ra öntjük, a fázisokat egymástól elválasztjuk, és a vizes fázist még kétszer, egyenként 30 ml metüén-kloriddal extraháljuk Az egyesített szerves fázisokat 10 ml vízzel mossuk nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és bepároljuk Kitermelés: 1,1 g barnás színű kristályos anyag (az elméleti érték 90,2%-a). Olvadáspont: 73-75 °C (acetonitrü). 5 10 16 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
