203184. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyárú nyersanyagként használható új kamilla populáció előállítására
1 HU 203 184 B 2 A találmány tárgya eljárás gyógyáru nyersanyagként használható Manzana típusú új kamillapopuláció előállítására, amelynek révén az eddig ismerteknél több hatóanyagot tartalmazó növény termeszthető és ebből a gyógyszerek gazdaságosabban állíthatók elő. A valódi kamilla (Matricaria chamomilla L.) virágfejeit ezeknek antiflogisztikus és szpazmolitikus hatása miatt széles körben alkalmazzák gyógyászati célokra. Ezek a növényi gyógyszerkincsek fontos és jelentős részét képezik. Gyógyászati szempontból különösen jelentősége van a kamazulén és az (-)-a-biszabololhatóanyagnak, ezért egy jó kamillagyógyszer ezekből a hatóanyagokból lehetőleg nagy mennyiséget tartalmaz. A 2402802 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírásban és az 1035096 számú olasz szabadalmi leírásban olyan kamillafajtát ismertetnek, amelynek mind (-)-a-biszabolol, mind kamazuléntartalma nagy; e DEGUMILL elnevezésű kamillafajtának nagy (-)-a-biszabolol- és kamazuléntartalma azonban csak akkor állandó, ha megakadályozzák az olyan más kamillafajtákkal való kereszteződést, illetve idegen beporzást, amelyeknek (-)-a-biszabolol és kamazuléntartalma jelentősen kisebb. Az idegen beporzással való kereszteződés veszélye majdnem mindig fennáll, mert a hatóanyagszegény vadkamilla gyakorlatüag mindenütt előfordul. A találmány feladata olyan eljárás létrehozása, amelynek révén olyan kamillanövény állítható elő, amely nem hajlamos a természetben előforduló kamillapopulációkkal (vadkamillákkal) való idegen beporzódásra, amiben jelentősen nagyobb a fontos (-)-a-biszabolol- és kamazulén hatóanyag mennyisége, mint bármely ismert kamillában, például a DEGUMILL fajtában, az anyagtartalom szempontjából homogén, amelyen belül a kamazulén- és (-)-a-biszabolol-tartalom tulajdonságai állandók (azaz homozigóták), továbbá a belőle előállított gyógyszerek mind minőségi, mind mennyiségi szempontokból homogén eredményeket adnak, ezenkívül egyéb tulajdonságai is az ismert kamillák azonos tulajdonságaival legalább egyenértékűek vagy ezeknél jobbak. A találmánnyal a kitűzött feladatot olyan eljárás létrehozásával oldjuk meg, amelynek folyamán DEGUMILL diploid kamillafajtát tetraploidizálunk, a kiválasztott tetraploid növényeket további szaporítási és kiválasztási lépéseknek, műveleteknek vetjük alá; a találmány szerinti eljárást az jellemzi, hogy a tetraploidizálásután 1. a tetraploid növényeket szelektáljuk, kiválasztjuk a hatóanyag-tartalom (a szárazanyag-tartalomra vonatkoztatva legalább 150 mg% kamazulén, legalább 300 mg% biszabolol és 50 mg%-nál kevesebb biszaboloid), az egyidejű virágzás, az egyenletes tőleveles elágazás, valamint a 25-35 mm közötti virágfejnagyság szempontjából megfelelő növényeket, az így kiválasztott növényeket klónozzuk és a klónozás révén kapott növényekből vetőmagvakat nyerünk, 2. az így nyert vetőmagvakból utódokat nevelünk, majd egy 1. lépés szerinti szelektálást, kiválasztást végzünk és a kiválasztott növényekből ismét vetőmagvakat nyerünk, 3. a 2. szerinti lépéseket, illetve műveleteket 2-4-szer ismételjük, 4. a 3. lépés szerint nyert vetőmagvakból utódokat nevelünk, ezeket az 1. lépés szerint szelektáljuk, az így szelektált, kiválasztott növényeket klónozzuk és azokból a kamillanövényekből, amelyet így nyerünk, szaporítóanyagot és/vagy kamillagyógyárut állítunk elő. Az eljárás lefolytatásához az ismert kamillanövények közül kiinduló növényként a DEGUMILL diploid kamillafajtát használjuk, amelyeket előzőleg már valamüyen ismert módon tetraploidizáljuk 1. lépés A tetraploid kamillanövények közül kiválasztjuk azokat az egyedeket, amelyek a) gyakorlatilag egyidejűleg virágzanak, b) egyenletes tőlevelű elágazásúak és a virágok a talaj fölött keskeny, körülbelül 5 cm vastagságú rétegen belül vannak, c) a virágfejek nagyok, külső átmérőjük körülbelül 30 mm, d) legkisebb kam azuléntar talmuk 150 mg%, legkisebb biszabolol-tartalmuk 300 mg%, a biszaboloidok (főként a biszabololoxid) mennyisége pedig jóval 50 mg% alatt van. (Valamennyi érték olyan virágfejekre vonatkozik, amelyeket 40 °C-os hőmérsékleten szárítunk, és amelyek aratását, betakarítását olyan állapotban végezzük, amelynél a virágfejek csővirágainak körülbelül 50%-a (40-60%-a) már kivirágzott. Ezeket a növényeket klónozzuk Ehhez a növényeket (klón anyanövényeket) először körülbelül 15 cm szárhosszúságúra visszavágjuk, 8-10 órás naphossznál és 12-14 °C hőmérsékleten újból hajtatjuk (rövid oldalhajtások). A rövid hajtásokat levágjuk és egy tőzeg-homok keverék talajba tűzdeljük A dugványok meggyökeresedése körülbelül 100% relatív légnedvesség, 15 °C levegő-hőmérséklet és 14 órás naphosszúság mellett 7-14 napig tart; Az ismertetett szokásos klónozás (dugványos szaporítás) helyett a növény osztódásra képes szövetrészeinek in vitro szaporítása (az úgynevezett osztódószövet-szaporítás) is alkalmazható. Egy kamillatenyészet létesítéséhez a növény különböző részei alkalmasak, főként a sarjcsúcsok vagy a hónaljrügyek A növényeknek H202-vel való leöblítése után a levél hónaljrügyek sarjcsúcsait aszeptikus körülmények között „lamináris áramban” (nagyteljesítményű lebegőanyagos szűrő turbulenciaszegény kiszorító áramlással) levágjuk és olyan reagens üvegekbe rakjuk át, amelyek egy tápanyaggal, például Murashige und Skoog-féle tápanyaggal (Physiol Plant 15, 473-497, 1962) vannak megtöltve. A reagens üvegeket 12-18 órára, előnyösen 16 órára beállított naphosszúságú klímatérbe helyezzük ahol a naphosszúságot fluoreszkáló fénycsövekkel állítjuk be, és ahol a fényintenzitást 500-10000 luxra, előnyösen 1000-3000 luxra, ahőmérsékletet pedig 15- 30 °C-ra, előnyösen 22-27 °C-ra állítjuk be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
