202885. lajstromszámú szabadalom • Eljárás proburzin és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 885 B 2 A találmány tárgya eljárás proburzin előállítására. A találmány közelebbről új proteinek izolálására vonatkozik, még közelebbről emlősök májában levő epevezetékekből vagy emlősök csontvelőjéből tisztított formában történő elkülönítésére vonatkozik. A proburzin, egy emlős protein, szintetizálható kémiai úton vagy előállítható rekombináns módon. A találmány tárgya továbbá eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, amelyek hatóanyagként proburzint tartalmaznak. A gerinces állatok immunrendszerének B limfocitái vagy B-sejtjei az állat szervezetébe kerülő idegen antigének ellen antitest-választ termelnek. A madarakban a prekurzor B-sejtek a Fabricius tömlő nevű szervben differenciálódnak. Az emlősökben még nem fedeztek fel a Fabricius tömlőnek megfelelő szervet, és fetételezik, hogy a B-sejteknek hematopoietikus prekurzorai vannak, és ezek differenciálódhatnak érett B-sejtekké a csontvelőben. A B-sejtek prekurzorainak B-sejtekké történő differenciálódásának hormonális indukálóját mindeddig nem ismerik. A következő tanulmányokban azonban a szerzők egy, a csirkék Fabricius tömlőjének extraktumában jelenlevő specifikus B-sejt differenciáló indukáló anyagot ismertetnek: Brand és munkatársai, Sciece, 193: 319-321 (1976); Bran és munkatársai, Nature, 269: 597-598 (1977); Goldstein és munkatársai, Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, XLI: 5-8 (1977); és Goldstein, „Molecular Control of Proliferation and Differentiation”, 197-202, Academic Press (1977). Nemrégen azonosítottunk egy tripeptid hormont, a búrzint, amelynek aminosavszekvenciája: Lys-His- Gly-NHz, amely a B-sejt differenciálódás specifikus indukáló anyaga. Ez a peptid a 4 584 284 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalomból burzopoietin néven ismert, és mind madarakban, mind emlősökben aktív. A technika állása szerint ismertek más endokrin peptidek. A szomatosztatin egy ciklikus tetradekapeptid, amelyet a hipotalamusz és a Langerhans-szigetek sejtjei termelnek. A szomatosztatin különböző hormonok felszabadulását gátolja, ilyen hormonok például a szomatotropin, tirotropin, kortikotropin, inzulin, glukagon, gasztrin, szekretin és a renin. Egy másik ilyen szabályozó peptid a tuftszin, egy bázikus tetrapeptid, amely a cirkuláló immunoglobulinból képződik, és amely a polimorfonukleáris leukocitákban és a makrofágokban a fagocitózist stimulálja [1. pl. V.A. Najjar és munkatársai, Nature, 228:672 (1970); A. Constantopoulos és munkatársai, Cytobios., 6:97 (1972); és Y. Stabinsky és munkatársai, Mol. Cell. Biochem., 30:71 (1980)]. Az ezen hormonok közötti összefüggés, belelértve a B-sejt differenciálófaktor burzint is, még tisztázásra vár. A B-sejtek differenciálódásában aktív különböző hormonok kapcsolódásának felfedezése, amelyek más szövetekre is hatással vannak, új kezelési lehetőségeket jelent az emberek és állatok immunrendellenességeinek és májműködési rendellenességeinek esetén. A találmány tárgya tehát eljárás egy 14 ammosavat tartalmazó peptid előállítása tisztított formában emlős csontvelőből vagy májból. Ez a peptid, a proburzin standard szintetikus kémiai módszerekkel szintén előállítható. Ez a peptid továbbá előállítható rekombináns módszerekkel is. A proburzin többek között képes a prekurzor csontvelősejtek B-sejtekké történő differenciálódását specifikusan indukálni. Ezért nagyon hasznos az emberek és állatok immunrendszere B-sejt hiányosságainak kezelésében, valamint a máj különböző rendellenességeinek kezelésében. Emellett a proburzin gátolja a növekedési hormon felszabadulását a hipofízisből. A növekedési hormon felszabadulása összefügg bizonyos rákos daganatok növekedésével. Ezért a proburzin bizonyos rákos megbetegedések kezelésében szintén hasznos, különösen a tumorgátlás területén. A találmány tárgya továbbá eljárás proburzint tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyszerkészítmények olyan betegségek, illetve állapotok kezelésére alkalmazhatók, mint például a B-sejt differenciáló faktor hiánya, illetve hiányosságai következtében fellépő nem megfelelő B-sejt differenciálódás, olyan hormonok nem megfelelő szabályozása, amelyeket a szomatosztatin szabályoz, használhatók továbbá az immunrendszer azon képességének fokozására, hogy a vérkeringésben levő idegen részecskéket fagocitálja. A proburzin használható továbbá rákos megbetegedések kezelésére. A találmány tárgykörébe tartozik a proburzin szintetikus vagy rekombináns termeléséhez szükséges új intermedierek előállítása, beleértve az új peptid-gyanta intermediereket, új vektorokat és új transzformált gazdasejteket. A következőkben röviden ismertetjük az ábrákat.- Az 1. ábra szarvasmarhamájból származó proburzin tisztított frakcióinak optikai sűrűségének grafikai illusztrálását mutatja;- A 2. ábra a proburzin vékonyrétegkromatográfiás gél mintázatát mutatja;- A 3A ábra az antiburzin antitest (pontok) és nyúlszérum (négyszögek) különböző titereinek optikai sűrűségét mutatja grafikusan ábrázolva;- A 3B ábra a KLH-kontroll konjugátum (négyszögek), KLH-burzin (háromszögek) és a szabad proburzin (körök) abszorbens koncentrációjának az optikai sűrűség függvényében történt grafikai illusztrációját mutatja;-A4, ábra a PTH aminosav degradációs ciklusonkénti kitermelését mutatja;- Az 5A ábra a Daudi-sejtek intracelluláris ciklikus GMP- szintjének illusztrációja proburzinnal, burzinnal, sertésinzulinnal végzett inkubáció után (A), ló mioglobinnal végzett inkubáció után (B) és szarvasmarha növekedési hormonnal végzett inkubáció után (C);- A 5B ábra az MOPC-315-sejtek intracelluláris ciklikus GMP szintjét mutatja proburzinnal, burzinnal, a fenti A, B és C anyagokkal, mint kontrollal végzett inkubálás után. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
