202884. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 884 B 2 játszatása után a védőcsoportot a szokásos módon távolíthatjuk el. A karboxil- védőcsoportként használt rövidszénláncú alkil-észtereket vagy aralkil-észtereket például híg lúgokkal 1-2 n nátrium-hidroxiddal vagy kálium-hidroxiddal végzett hidrolízissel távolíthatjuk el. A benzil-oxi-karbonil-csoportot vagy egy benzilészter benzilcsoportját célszerűen katalitikus redukcióval távolíthatjuk el, szénhordozós palládiumkatalizátor vagy szénhordozós palládium/ammónium-formiát jelenlétében, vagy HBr/ecetsav alkalmazásával. A tercbutoxi-karbonil-csoportot vagy egy tere- butoxi-észter terc-butoxi-csoportját erős savval - például trifluorecetsavval - végzett kezeléssel távolíthatjuk el, szobahőmérsékleten, jeges hűtés alkalmazása közben. A fenti eljárásokkal előállított (I) általános képletű tripeptid- származékokat szokásos módon alakíthatjuk a fenti említett sószármazékokká. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű tripeptid-származékokat és sóikat ismert módon - például extrakcióval, koncentrálással, semlegesítéssel, szűréssel, átkristályosítással, oszlopkromatográfiás eljárással, nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással vagy ioncserélő gyantával - izolálhatjuk és tisztíthatjuk, a fenti eljárások megfelelő kombinálása segítségével. Az (I) általános képletű tripeptid-származékok és sóik kiváló farmakológiai aktivitással, különösen vérnyomáscsökkentő hatással rendelkeznek, és fenti hatásuk következtében gyógyszerkészítmények hatóanyagaként szív-érrendszeri betegségek, például magas vérnyomás és pangásos szívbetegségek kezelésére és megelőzésére használhatók. A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű tripeptid-származékok és sóik kiváló vérnyomáscsökkentő hatását az alábbiakban ismertetett in vivo vérnyomáscsökkentő aktivitási vizsgálat segítségével bizonyítjuk, renális hipertenzív patkányokat alkalmazva. Az in vitro ACE-gátló aktivitási vizsgálat eredményeit is ismertetjük. Antihipertenzív aktivitás in vivo 5 hetes hím Spargue Dawley patkányok bal veseartériáját ezüst csipesz segítségével leszűkítjük (belső átmérő 0,22 mm), éteres altatás közben. A jobb vesét és vese-artériát érintetlenül hagyjuk. A leszűkítés után közel 6-10 héttel kiválasztjuk azokat a patkányokat, amelyek 180 mmHg-nél magasabb. Ezeket a kezelt patkányokat két-vesés Goldblatt-típusú renális hipertenzív patkánynak nevezzük, és a renin-angiotenzinfüggő hipertenzió tipikus modelljének tekintjük. A vérnyomást farok-mandzsetta segítségével mérjük, programozott elektro-szfigmomanométert (PE- 300, Narco Biosystem, U.S.A.) használva, 38 ‘C-on 10 percen át tartó melegítés után. A vizsgált vegyületek vérnyomáscsökkentő aktivitását a renális hipertenzív patkányoknak való egyszeri orális adagolás után értékeljük, csoportonként 3-5 patkányt vizsgálunk. Az eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. ACE-gátló aktivitás in vitro A vizsgálat elvégzéséhez használt elegy nyúltüdő ACE- preparátumot, szintetikus szubsztrátot (5 mmól/1 hippuril-L-hisztidil-L-leucint), 300 mmól/1 nátriumkloridot és 100 mmól/1 foszfát-puffért (pH 8,3) tartalmaz. A komponenseket 0,300 ml végtérfogatban elegyítjük, és 37 °C-on 30 percen keresztül inkubáljuk a vizsgált vegyület jelenlétében vagy távollétében. A reakciót 300 pl 1 n sósavoldat hozzáadásával leállítjuk, és a képződött hippursavat 2 térfogat etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátot elpárologtatjuk, a maradékhoz desztillált vizet adunk, és a hippursav mennyiségét 228 nm-en mért abszorpciója segítségével spektrofotometriásán (Hitachi 100-41) meghatározzuk. Az ACE-gátlás mértékét a vizsgált vegyület jelenlétében, illetve távollétében mért aktivitásokból számítjuk ki. Az IC50 értéket (az ACE-aktivitás 50%-os gátlásához szükséges moláris koncentrációt) a dózishatás görbéből olvassuk le. Az eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 1. táblázat: (I) általános képletű vegyületek farmakológiai aktivitása Példa Rl-WT m R2 R3 Vérnyomásvál- ACE-gátló tozás (mmHg) aktivitás száma 9 órával a (IC50, beadás után*1 mól/1) 1. 3. 4. 8. egyes kötés egyes kötés egyes kötés egyes kötés 5,6xl0'9 l,3xl0'8 8,4xl0'9 2,3xl0‘8 6
