202596. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-aciloxi-biciklo [3.3.0] oktán-7-on-2-karbonsav-észterek recemát-hasítására sztereospecifikus enzimes vagy mikrobiológiai acilát-hidrolízissel
11 HU 202 596 B 12 sav-metil-észtert kapunk, amely hexán/diizopropil-éter elegyből végzett kristályosítás után 64-65 *C-on olvad. A fajlagos forgatási érték: [a] g* = +25,7* (c = 1,045; kloroform). Autentikus standarddal szemben végzett összehasonlító méréssel 96%-os enantiomer-felesleget állapítottunk meg. 8. példa Egy 2 literes Erlenmeyer-lombikot, amely 0,1% peptont, 0,2% kukoricalekvárt, 0,5% glükózt és 0,5% élesztőkivonatot tartalmazó 7,3 pH-jú steril tápoldattal van töltve, beoltunk a Corynebacterium equi (ATCC 21107) törzs ferde agaros tenyészetével, és 30 *C-on 48 óra hosszat rázatjuk. Két ilyen szaporítótenyészet tartalmával oltunk be egy 20 literes fermentort, amely a szaporító tenyészetéhez hasonló összetételű 14 liter steril táptalajjal van töltve. Silicon SH habzásgátló adagolása közben 29 *C- on és 0,7 bar túlnyomáson 15 liter/perc levegőztetés és 220 fordulat/perc keverés mellett tenyésztünk. A szubsztrátot 16 órás szaporítási idő után 6 g (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-2P-karbonsav-metil-észter (7 képlet) 150 ml etanollal készített sterilre szűrt oldata formájában adagoljuk be, és tovább folytatjuk a keverést és levegőztetést. A szubsztrátbeadás után három órával a beadott szubsztrát 50%-a átalakul. Az elegyet metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, és az extraktumot vákuumban szárazra bepároljuk. A kapott maradékot metanolos kezeléssel megszabadítjuk a szilikonolajtól, és szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Ilyenképpen 1,9 g (+)-3a-hidroxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-ösztert kapunk, amely hexán/diizopropil-éter elegyből végzett átkristályosítás után 63-65 *C-on olvad. A fajlagos forgatási érték: [a] j? = +25,2* (c = 1,04; kloroform). 9. példa A 7. példában leírt körülmények között a Trichoderma koningi (CBS 85068) törzs tenyészetével 6 g (±>3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-2|i-karbonsav-metil-észter (1 képlet) 28,5 órás fermentációs idő után 2,0 g (+)-3a-hidroxi-7,7- -(2,2-dimetil-trinietiléndioxi)-cisz-biciklo-[3.3.0] oktán-2P-karbonsav-metil-észtené alakítunk áL A hexánból kristályosított anyag forgatási értéke: [a] * = +24,2' (c = 1,015; kloroform). 10. példa A 8. példában leírt körülmények között a Sarcina lutea (ATCC 9341) törzs tenyészetével 6 g (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktin-2ß-karbonsav-metil-0sztert (1 képlet) 135 órás fermentációs idő után 1,85 g (+)-3a-hidroxi-7,7- -(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktin-2ß-karbonsav-metil-0sztérré alakítunk áL A forgatási érték:: [a] g*= +23,6* (c = 1,010; kloroform). 11 11. példa A 7. példában leírt körülmények között a Penicillium citrinum (ATCC 8506) törzs tenyészetével 6 g (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-6sztert (1 képlet) 8 órás fermentációs idő után 23 g (+)-3a-hidroxi-7,7- -(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo[3.3.0] oktán-2ß-karbonsav-metil-0szterr6 alakítunk át. A fajlagos forgatási érték: [a] g* = +21,8* (c = 1,05; kloroform). 12. példa A 8. példa körülményei között a Flavobacterium lutescens (IFO 3085) törzs tenyészetével 6 g (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-0sztert (7 képlet) 47 órás fermentációs idő alatt 1,8 g (+)-3a-hidroxi-7,7- -(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-0sztérré alakítunk át. A fajlagos forgatási érték: [a] g1 = +21,8* (c = 1,1245; kloroform). 13. példa 300 mg (±)-3a-butiriloxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-^-karbonsav-metil-észtert (6 képlet) oldunk 9 ml etanolban, és 750 mg Rhizopus eredetű „Saiken” lipáz (Nagase cég) 100 ml 7 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferral készített oldatával elegyítjük. A szuszpenziót 28 *C-on 150 óra hosszat rázatjuk körkörös rázógépen, majd metil-izobutil-ketonnal extraháljuk. Az extraktumot vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot az elreagálatlan észter-acilát elválasztása céljából szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Ily módon 95 mg (+)-3a-hidroxi-7,7- -(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] cktän-2ß-karbonsav-metil-0sztert kapunk, amelynek fajlagos forgatási értéke: [a] g* = +22,8* (c= 0,905; kloroform). 14. példa A13. példa körülményei között 300 g (±)-3a-butiriloxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktdn-2ß-karbonsav-metil-ösztert (6 képlet) 7 pH-jú foszfátpufferben 750 mg Alcalose T néven forgalmazott proteáz (Novo Industria cég) jelenlétében reagáltatunk. Az elegyet 28 *C-on végzett 23 órás rázatás után metil-izobutü-ketonnal extraháljuk, és az extraktumot szilikagélen kromatografáljuk. Eképpen 100 mg (-)-3a-hidroxi-7,7-(23-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] (*tán-^-karbonsav-metil-észtert kapunk, amelynek fajlagos forgatási értéke: [a] g5 = = -24,9* (c = 1,020; kloroform). 75. példa 300 mg (±)-3a-(Dimetil-acetoxi)-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo[3.3.0] (*tán-^-karbonsav-metil-észtert (7 képlet) oldunk 9 ml etanolban, és sertésmájból kivont észteráz (Boehringer cég) 1,5 ml 1:40 hígítású oldatának 100 ml 7 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferrel készített oldatával elegyítjük. Az elegyet 28 *C-on 1 óra hosszat rázatjuk rázógépen, majd metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, és a vákuumban bepárolt extraktumot szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. így 114 mg (+)-3a-hidroxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-észtert kapunk olajként, amely lassan átkristályosodik. Olvadáspont: 64-65 ‘C. Fajlagos forgatóképesség: [a] g1 = +25,1* (c = 1,010; kloroform). 16. példa 300 mg (±)-3a-(Karboxi-propioniloxi)-7,7-(23-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] okt0n-2ß-karbonsav-metil-észtert (8 képlet) oldunk 9 ml etanol-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
