202595. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi alfa-1-foetoproteinnel kapcsolódó egér monoklonális ellenanyag előállítására
5 HU 202 595 A 6 A leírt módon előállított ellenanyagok munkahígítása; 5 x 104,1 x 103 illetve 1 x 10*. (AFP/1, AFP/14, AFP/33 sorrendjében). Humán szérumalbuminnal megvizsgáljuk, hogy az előállított ellenanyagok nemspecifikus, ún. keresztréak- 5 ciót mutatnak-e. A peroxiddal detektált tesztben egymás mellett 3 pg/ml AFP-vei és pg/ml HSA-val végezzük el a mérést. Az AFP mellett kapott értéket 100%-nak véve, ehhez viszonyítva fejezzük ki a HSA-val kapott - nem kívánatos - keresztreakció mértékét 10 A választott három ellenanyagnál ez az érték 0%, megengedhetőnek tartjuk a max. 10%-os hatást A ellenanyagok egymás közötti kompetíciós vizsgálatát úgy végezzük, hogy a kísérletbe beállított ellenanyagokból peroxidáz-jelzett ellenanyag-enzim komp- 15 lexeket készítünk. [Wilson, M. B. és Nakane, P. K. (1978) Immunofluorescens and Related Technignes, Knapp W., Holubar K. és Wiek, G. szerkesztésében Elsevier North Holland, Amsterdam, 215. old.], másrészről a jelöletlen ellen- 20 anyagokból 100 pg/ml-es oldatokat készítünk elő. 3 pg/ml AFP jelenlétében matrix rendszerben valamennyi jelöletlen ellenanyagot összehozunk valamennyijelölt ellenanyaggal. A színképződés leolvasása után a kompetíció mértékének kiszámítása: 25 E492 kompé ti tor nélkül------------------------------------ x 100 = leszorítás %. E492 kompetítor jelenlétében 30 Eltérő determinánshoz kötődő ellenanyagnak ítélhető az az ellenanyagpár, ahol a leszorítás mértéke kisebb, mint 25%. első reagáló ellenanyag második AFP/1 AFP/14 AFP/33 reagáló -------------------------------------------ellenanyag Kompetíció % AFP/1 78,0 ±4,4 69,7 ± 6,0 1,8 ±3,6 AFP/14 78,5 ±9,4 78,6 ±9,6 20,6 ±13,2 AFP/33 9,7 ±8,2 11,7 ±10,6 63,1 ±7,5 A teszthez alkalmas ellenanyagpár lehet AFP/1 és AFP/33 vagy AFP/14 és AFP/33. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás emberi alfa-l-foetoproteinnel kapcsolódó egér monoklonális ellenanyag vagy ellenanyagpár előállítására hibridóma technikával, azzal jellemezve, hogy az immunizálási eljárást AxDBA2 F! hibrid egértörzsön, öt ciklusban, 10-12 héten keresztül ciklikusan váltakozó antigénbeviteli móddal végezzük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az immunizálást az I. táblázat szerinti antigénbeviteli móddal végezzük. 3. Eljárás emberi alfa-l-foetoporotein enzim-immunteszthez alkalmas monoklonális ellenanyagpár előállítására, azzal jellemezve, hogy immunizált egértörzsből származó, tumorsejttel hibridizált lépsejtek kiónjai közül kiválasztjuk a specifikus ellenanyagtermelőket, az egyes kiónokkal nyert monoklonális ellenanyagokat matrix rendszerű kompetíciós vizsgálatban jellemezzük és az eltérő antigéndeterminánshoz kötődő ellenanyagpárok közül úgy határozzuk meg a kívánt ellenanyagpárt, hogy az egyik plasztikfelülethez kötődve, a másik a detektáló enzimhez kötve ne veszítse el immunaffinitását. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Szvoboda Gabriella osztályvezető Babits - Magyar Amerikai Kiadó Rt., Szekszárd
