202579. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentációban felhasználható mikroorganizmusok vagy mikroorganizmus-részek gélbe zárására
3 HU 202 579 B 4 gyöngyöket szűréssel különíthetjük el, majd desztillált vízzel oldószermentesre mossuk, és kívánt esetben szárítjuk. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa Streptomyces lavendulae ATCC 12 950 7-8 napos ferde agar tenyészetéről steril desztillált vízzel 5x x 107 spóra/cm3 koncentrációjú spóraszuszpenziót készítünk. 10 cm3 így kapott spóraszuszpenziót 90 cm3, előzetesen 121 'C-on 30 percig sterilizált, majd 50 ‘C-ra hűtött 4%-os agar oldathoz adunk. Ezt a keveréket perisztaltikus pumpa segítségével - steril eszközök alkalmazásával - 1000 cm3 5 ‘C-ra hűtött izo-oktanolba (2-etil-hexanoIba) csepegtetjük. A keletkező gélgyöngyök egymáshoz tapadását nitrogéngáz lassú átbuborékolta tásával gátoljuk. A csepegtctés befejezése után a nitrogéngáz átáramoltatását még 4-5 percig folytatjuk, majd a gélgyöngyöket kiszűrjük, 0,02 tömeg% Tween 80-at tartalmazó steril desztillált vízzel oldószermentesre mossuk. Szabályos gömb alakú, 1-5 mm átmérőjű gélgyöngyöket kapunk. Megismételjük a fenti sejtrögzítési eljárást azzal a különbséggel, hogy kicsapószerként i-oktanol helyett az I. táblázatban felsorolt oldószereket használjuk. Az 1. példában megadottakkal azonos eredményeket kapunk. I. táblázat Oldószer Vízoldhatóság g/100g víz Sűrűség g/crri Viszkozitás cP Forrás pont "C Ülepedési sebesség cm/sec i-oktanol 0,1 0,834 7,0 1834 0,8-14 benzil-alkohol 4,0 1,050 5,2 2054 0,4-0,8 n-amil-alkohol 2,7 0,814 4,3 138,1 2,8-3,4 ciklohexanon 2,4 0,948 5,8 156,7 0,8-1,5 n-butil- acélát 0,5 0,882 0,7 126,1 14-2,5 toluol 0,047 0,867 0,58 180,0 2,3-2,9 acetecet-észter 2,85 1,025 1,74 180,0 0,5-0,7 etil-acetát 7,76 0,900 0,45 77,0 1,8-2,4 2. példa 0,5% porszóját, 1,0% glükózt és 2,0% szálas agart tartalmazó ferde agar táptalajon tenyésztett Streptomyces argillaceum ATCC 12956 spóraszuszpenziójával az alábbi összetételű, 121 *C-on 20 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be: mogyoróliszt 2,0% hídról izált kazein 0,2% glicerin 4,0% nátrium-klorid 0,3% kalcium-karbonát 0,5% (A csapvízzel feltöltött táptalaj pH-ja sterilizálás előtt 7,0). A tenyészetet 48 órán át 32 *C-on 360 fordulat/pcrc sebességgel rázzuk. Az így kifejlődött vegetatív tenyészetből 10 cm3-t adunk 90 cm3 45 *C hőmérséklet 0,4%os agar oldathoz, majd a keverékből az 1. példában leírtak szerint gélgyöngyöket készítünk. 3. példa Streptomyces diastatochromogenes var. RO-31 [NCAIM (P) B 00366] mikroorganizmust az alábbi összetételű ferde agar táptalajon spóráztatunk: élesztőkivonat 0,1 % húskivonat 0,1 % tripton 0,2 % FeS04 3 x 10-*% glükóz 1,0 % NajHPO« 0,713% KHjPO, 0,363% mosott, szálas agar 2,0 % (A csapvízzel feltöltött táptalaj pH-ja sterilizálás előtt 7,0.) A kb. 7-8 napos spórás tenyészetet steril desztillált vízzel vagy fiziológiás sóoldattal lemossuk, és a spóraszuszpenzió koncentrációját 3 x 106 spóra/cm3-re állítjuk be. Az így kapott spóraszuszpenzióból az 1. példában leüt módon készítünk agar-gélgyöngyökeL 4. példa Rhodococcus sp. NCAIM (P) B 001003 kb. 4 napos ferde agar tenyészetéről steril desztillált vízzel 8 x x 106 sejt/cm3 koncentrációjú sejtszuszpenziót készítünk. A szuszpenzió 10 cm3-ót 90 cm3 45 *C hőmérsékletű steril 4%-os agar oldathoz adjuk, majd a keverékből az 1. példában leírtak szerint gélgyöngyöket képezünk. A gélgyöngyökkel az alábbi összetételű, 121 ‘C-on 25 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be: koleszterin 1,0 % kristálycukor 0,5 % szójaliszt 0,7 % nyers napraforgó lecitin 0,5 % Tween 60 0,2 % KH2PO„ 0,1 % CaC03 0,1 % NaCl 0,1 % MgS04.7H20 0,05% Struktol B-2020 0,1 % (habzásgátló, gyártja: Kőbányai Gyógyszerárugyár) (pH sterilizálás előtt: 6,0) A beoltott lombikokat 30 ‘C-on síkrázógépen 300 fordulat/perc sebességgel rázatjuk 3 napig. A koleszterin-oxidáz szintet Allain és munkatársai eljárása szerint méijük. 5. példa A 3. példában leírt összetételű ferde agar táptalajon Streptomyces rubrifaciens törzset spóráztatunk. A kb. 4-5 napos spórás tenyészetet steril desztillált vízzel vagy fiziológiás sóoldattal lemossuk, és a spóraszuszpenzió koncentrációját 5x10* spóra/cm3-re állítjuk be. Az így kapott spóraszuszpenzióval az 1. példában leírt módon agar gélgyöngyöket képezünk. A gélgyöngyökkel az alábbi összetételű, 121 ‘C-on 25 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be: élesztőkivonat 0,1% húskivonat 0,1% tripton 0,2% 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
