202556. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antikoaguláns hatású peptidalkohol-származékok előállítására

HU 202556B

alkalmazható olajok közé tartozik a világítóolaj, az állati, növényi eredetű vagy szintetikus olajok, pl. a mogyoróolaj, szójaolaj és az ásványiolaj. Folyékony hordozóként, különösen injektálható oldatok esetében általában a következőket részesítjük előnyben: víz, sóoldat, vizes dextróz és hasonló cukor-oldatok, etanol és glikolok, pl. a propüénglikol vagy a polietilénglikol.

A vegyületek bevihetők depó-injekció vagy beültetett készítmények alakjában is. Ezek oly módon készíthetők ki, hogy lehetővé tegyék az aktív komponens késleltetett felszabadulását. Az aktív komponens pelletekké vagy kis hengerekké sajtolható és szubkután vagy intravénásán beültethető depó-injekció vagy beültetett test alakjában. A beültethető készítményekben közömbös anyagokat, így biológiai úton lebontható polimereket vagy szintetikus szilikonokat alkalmazhatunk. Ilyen pl. a Silastic, a Dow-Coming Co. által gyártott szilikongumi.

A találmányt a következő, nem-korlátozó jellegű példákkal illsuztráljuk.

Példa

Szén-terminális peptid-alkoholok előállítása

A peptideket egy p-nitro-benzhidrilidén-izonitzáljuk, amelyet DeGrado és Kaiser módszerével - J.Org.Chem. 45, 1295-1300 (1980) - állítottunk elő. Az oxim-gyantát (0,54 g; 0,52 mmóI/0,97 mmól)-g helyettesítettséggel (bevisszük egy Applied Biosystems 430A peptid-szintetizátorba. Szimmetrikus anhidridek alakjában kétszeres feleslegben vett Boc-védett aminosavakat kapcsolunk egyenként, szekvenciálisán. Az oldallánc-védelemre a következő csoprotokat alkalmazzuk: Asp(Chx), Glu(Bzl), Tyr(2-BrZ). A szintetizátor programjait úgy állítottuk össze, hogy mindegyik ciklusban a következő műveleteket végeztessük el:

1) 1 mmól előre elkészített szimmetrikus bevitele;

2) 5 térf.% további DIEA adagolás (?);

3) Vortex-kezelés 1 órán át;

4) leszívatás;

5) mosás DCM-mel (5x/l perc);

6) mosos (1 perc) 20% TFA-t tartalmazó DCM- mel;

7) 15 percen át kezelés 20% TFA-t tartalmazó DCM-mel;

8) mosás DCM-mel (3x/0,5 perc);

9) mosás (4 perc) izopropanollal;

10) mosás (3x/0,5 perc);

11) mosás izopropanollal (4 perc);

12) mosás (3xA),5 perc) DCM-mel;

13) mosás (4 perc) izopropanollal;

14) mosás (3x/0,5 perc).

A szintézis befejezése után a gyantát vákuumban szárítjuk. Ezután szobahőmérsékleten 20 órán át 2 egyenértéknyi (a gyanta kiindulási helyettesítettségére vonatkoztatva) alaniollal és 1 egyenértéknyi DCM-es ecetsavval kezeljük. A gyantát szűrjük és a szűrletet liofilizáljuk. A maradékot -5 ‘C-on 30 percen át 2% anizolt tartalmazó folyékony HF-dal kezeljük. A IIP vákuumban való eltávolítása után a pepiidet 30% acetonitrillel extraháljuk és liofilizáljulc A maradékot preparatív HPLC-vel tisztítjuk

7

(Dynamax C18 21,4x150 mm-es oszlop), acetonitril/0,l%-os TFA rendszer alkalmazásával. Az ezzel az eljárással előállított peptid FAB-MS-sel a keresett molekula-ion csúcsot szolgáltatja és az aminosav-elemzés eredményei megegyeznek a keresett peptid adataival. Dy módon a következő peptideket állíthatjuk elő, a jelzett tulajdonságokkal:

1) SucFEFIPEYL-ol

MS 1092,6 FAB-MS (MH)+1094,0 tR 17,53 E2801573 peptid-tartalom 79,8%

Glx(2) Pro(2) Ile(l) Tyr(l) Phe(l)

2,081,010,94 0,990,98

2) Sue PEPLPEEYChA-ol

MS 1332,7 FAB-MS (MH)+1333,4 tR 20,2 perc E280 1755 peptid-tartalom 73%

Glx(3) Pro(2) He(l) Tyr(l) Phe(l) Cha(l) 3,032,030,921,000,970,95

3) SucFEPIPEEYL-ol

MS 1221,6 FAB-MS (MH)+1222,8 tR 16,83 E280 1686 peptid-tartalom 72,1%

Glx(3) Pro(2) Ile( 1) Tyr(l)Phe(l) 3,091,980,960,961,00

tR - a vegyület nem-korrigált retenciós ideje meghatározotott kromatográfiás műveletben.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás

X-Ai -A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A1 o-ol általános képletű peptid-alkohol-származékok előállítására, ahol a képletben

X jelentése aminoterminális maradék, mégpedig karboxü-(l-4 szénatomos alküén-karbonü-csoport,

Ai jelentése egy kötés,

A2 jelentése Phe-csoport,

A3 jelentése Glu-csoport,

A4 jelentése Pro-csoport,

A5 jelentése Ile-csoport,

Aó jelentésePro-csoport,

A7 jelentése Glu-csoport,

As jelentése Tyr-, Glu-csoport,

A9 jelentése Tyr-, Tyr-Cha-csoport, vagy ha As jelentése Tyr-csoport, akkor Leu-ol-csoport,

Ai 0 jelentése Leu-ol, Ala-ol-csoport, és ahol az aminosavak L-konfigurációjúak, azzal jellemezve, hogy

1) egy, az alfa-amino-csoporton és kívánt esetben az oldalláncon védett, az A9 vagy As aminosavnak megfelelő aminosavat kondenzálunk egy aktivált gyanta hordozóhoz;

2) ezt követően a többi, az alfa-amino-csoporton és kívánt esetben az oldalláncon védett aminosavat a karboxi-terminális végtől az amino-terminális vég felé haladva, az As-Ai sorrendben, és végül az X csoprotot kondenzáljuk a növekvő peptidlánc amino-terminális végéhez, mimellett a peptidláncban jelenlevő amino-védőcsoportokat eltávolítjuk, majd

3) a gyantához kötött peptidet 2 mól egyenértéknyi, az Aio-olnak megfelelő karboxi-terminális aminoalkohollal és 1 mól egyenértéknyi, diklórmetánban oldott ecetsavval kezeljük, és egyidejűleg a karboxi-terminálsi peptidalkoholt kondenzáljuk a

8

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

5