202546. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidoglükán monomer N-acil-származékainak és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására
HU 202546B A találmány tárgya eljárás peptidoglüdán monomer (PGM) új N-acil-származékainak és azok farmakológiailag elfogadható sóinak az előállítására, amelyek különösen immunmodulátorként és immunadjuvánsként alkalmazhatók. Ismeretes /Carbohydr. Rés. 110, (1982), 320- 325/, hogy a (II) általános képletű peptidoglükán monomer (PGM) immunmoduláló tulajdonságokkal /Z. Immun.-Forsch., 155, (1979), 312-328/, valamint antimetasztatikus aktivitással rendelkezik /EurJ.Cancer Oncol. 19, (1983), 681-686/. A vegyüld nem toxikus és nem pirogén. Vízben jól oldódik, szerves oldószerekben azonban oldhatatlan. Erősen hidrofil és lipofób tulajdonságai következtében nem képes a szervezet lipofilmembránjain keresztül jutni. Az üyen vegyületek esetén a lipofilitás és a hidrofilitás mértéke jelentősen befolyásolhatja az aktivitást. A találmány tárgya eljárás a peptidoglükán monomer (I) általános képletű új N-acü-származékainak és azok farmakológiaüag elfogadható sóinak az előállítására, ahol R jelentése egy 2-18 szénatomos egyenes szénláncú alkilkarbonsav, 5-18 szénatomos elágazó szénláncú alkilkarbonsav, 12-18 szénatomos alkenilkarbonsav vagy egy 7-11 szénatomos aromás karbonsav acücsoportja. A 2-18 szénatomos egyenes szénláncú alkilkarbonsav acilcsoportja lehet például acetü-, kapriloü, kaprinoü-, leuroü-, palmitoü- vagy sztearücsoport. Az 5-18 szénatomos elágazó szénláncú alkilkarbonsav acücsoportja előnyösen pivaloücsoport. A 12-18 szénatomos alkenilkarbonsav acilcsoportja előnyösen oleoücsoport. A 7-11 szénatomos aromás karbonsav acücsoportja előnyösen benzoücsoport. A peptidoglükán monomer (PGM) új N-acüszármazékainak farmakológiaüag elfogadható sói lehetnek szervetlen vagy szerves bázisokkal alkotott sók, mint például alkálifémsók (például nátriumsó, káliumsó), alkáliföldfémsók (például kalciumsó), ammóniumsók és szerves bázissal alkotott sók (például etanolaminsók, trietanolaminsók) és más fiziológiaüag tolerálható sók. A találmány értelmében a PGM (I) általános képletű új N-acü-származékait önmagában ismert módszerekkel, a (II) általános képletű PGM (Hl) általános képletű savval végzett acüezésével áüítjuk elő. A (III) általános képletben R jelentése a fenti. Az eljárásban a savat valamely aktivált formában, például anhidrid, aktív észter formájában alkalmazzuk. Aktív észter alatt N-hidroxi-szukcinimiddel, N-hidroxi-benzotriazoüal, N-hidroxi-ftálimiddel és hasonló alkoholokkal alkotott észtert értünk. Az aktív észtert vízmegkötőszer, például diciklohexil-karbodiimid (DCC) vagy más, az irodalomból ismert karbodiimid, N,N-karbonil-diimidazol, p-toluolszulfonát vagy más szulfonátok jelenlétében állítjuk elő. Az üyen reakciók végrehajtásának körülményei az irodalomból ismertek. A karbodiimidekkel végzett reakciót előnyösen 20-25 'C-on hajtjuk végre. A PGM ecetsavanhidriddel végzett acüezését 1 egy bázis, például nátrium-hidrogén-karbonát jelenlétében, míg a megfelelő aktív észterrel végzett acüezést egy inert oldószerben, például dimetü-formamidban (DMF) egy szerves bázis mint katalizátor jelenlétében hajtjuk végre. A PGM és az aktív észter mólaránya 1:1,3 és 1:2 közötti, a PGM és az oldószer aránya 1:30 és 1:100 (tömeg/térfogat) közötti. Szerves bázisként előnyösen egy amint, mint például trietü-amint (TEA) alkalmazunk, a PGM-re számítva 1:2 és 1:5 közötti mólarányban. A reakciót 20-25 °C-on 24 óra alatt hajtjuk végre. A reakciót vékonyrétegkromatográfiával (TLC) követjük nyomon, adszorbensként szüikagélt használunk, eluálószerként pedig olyan oldószer-rendszert, amely alkalmas a kiindulóanyagok és a termékek elválasztására, üyen például a n-propanol és víz 7:3 térfoga tarányú elegye (A rendszer). A terméket olyan szerves oldószer segítségével nyerjük ki, amelyben a termék oldhatatlan, üyen például az etü-acetát. A terméket szokásos módszerekkel, például oszlopkromatográfiával különböző adszorbenseken, például szüikagélen az említett A- rendszerrel végzett eluálással vagy Sephadex-en vízzel végzett eluálással tisztítjuk. A találmány tárgya továbbá eljárás gyógyszerkészítmények előáüítására, amelyek hatóanyagként a peptidoglükán monomer (I) általános képletű új N- acü-származékát vagy annak farmakológiaüag elfogadható sóját tartalmazzák. Az (I) általános képletű immunmoduláns vagy immunadjuváns hatóanyagot a szokásos farmakológiaüag elfogadható hordozóanyagokkal és segédanyagokkal alakítjuk gyógyszerkészítménnyé. A gyógyszerkészítményt előnyösen parenterálisan adagoljuk. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek biológiai aktivitását 2-2,5 hónapos hímnemű CBA egereken vizsgáltuk. Az áüatokat legalább egy héttel a vizsgálat előtt a laboratóriumi körülményekhez szoktattuk. A PGM N-acil-származékainak hatékonyságát negatív kontrollként fiziológiás sóoldatot és pozitív kontrollként PGM-t kapott egerek eredményeivel hasonlítottuk össze. A vizsgált anyagokat intravénásán adagoltuk egyszeri 200p/egér, ületve 10 mg/kg dózisban. Az immunfarmakológiai aktivitás következő hatásait figyeltük meg: lép tömege, limfociták száma és a PFC szám (plakk-képző sejtek) Jeme módszerével /Ceü Bound Antibodies, Whister Institute Press, Phüadelphia (1963), 109/. Alép tömegét mg-ban fejeztük ki. A lép limfociták számát a ml-enkénti abszolút számban, míg a PFC számot teljes számokkal, ületve 106 léplimfocita aktivitására vonatkoztatva fejeztük ki. A tesztcsoportok, ületve a megfelelő kontroücsoportok 5-7 egérből áütak. A PGM minden N- acü-származékát legalább három alkalommal vizsgáltuk különböző időkben. A statisztikai feldolgozást parametrikus Studen t-teszttel végeztük, az eredeti Stat Works komputer programot alkalmazva. A különbségek szignifikanciáját 5%-nál kisebb elfogadhatósági értéknél határoztuk meg. Az eredményeket az I. táblázatban foglaltuk össze. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
