202492. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piperidin opioid antagonisták és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

1

HU 202 492 B

2

újra hidratált szövettel iniciáltuk. A reakcióelegyet 20 percig 37 °C-os vízfürdőn inkuháltuk. A reakciót gyors szűréssel (Amicon vacuum réteg) Whatman GF/C üvegszűrőn leállítottuk, amely szűrőt előzetesen 7,4 pH-jú pufferrel átitattunk. A szűrletet 2 X 5 ml jéggel hűtött Krebs-Hepes 7,4 pH-jú pufferrel mostuk. A mosott szűrletet szcintillációs mérőcsövekbe helyeztük és 10 ml PCS (Mersham)-t adtunk hozzá, majd a mintákat Searle D-300 bétaszámlálóval számláltuk. Az átlagokat és a statisztikushibát bizonyos esetekben háromszoros statisztikus meghatározással mértük. Az eljárást a kappa receptor esetében kissé módosítottuk. A szövetet előzetesen 100 nm koncentrációjú mű és delta receptor blokkoló ágensekkel kezeltük. A reakcióelegy inkubálási ideje 37 °C-on 45 perc volt.

A Ki értékeket statisztikai program segítségével az alábbi képlet alapján számítottuk;

IC50

1 +---------------------------------Kd

ahol IC50 az a koncentráció, amely mellett a 3H ligán - dum 50%-a a vizsgált vegyülettel van kicserélve és Kd a 3H ligandum disszociációs állandója a receptoron.

A találmány szerinti vegyületek opioid receptor kötési kísérletben mért értékei az I. táblázatban találhatók. A táblázatban az 1. oszlopban a vizsgált vegyületek példaszámát adjuk meg. A 2. oszlop nanomólban (nm) tartalmazza a Ki értéket a mű receptorra; a 3. oszlopban pedig a Ki érték található nm értékben a kappa receptorra. A táblázatban találhatók továbbá azok a vegyületek, amelyeket az I-IV. táblázatokban A-F osztályba soroltunk, és általuk a jelen találmány szerinti vegyületek aktivitását ismert vegyületek aktivitásával összehasonlítottuk. Az A-F vegyület elnevezés alatt az alábbiakat értjük:

A vegyület: 4 béta-(3-hidroxi-fenil)-3béta,4alfa-dimetil-alfa-fenil-l-piperidin-propanolhidroklorid B vegyület: 3-(l,3alfa,4béta-trimetil-4alfa-piperidü)-fenol-hidroklorid

C vegyület: 3-[4béta-(3-hidroxi-fenil)-3béta,4alfadimetü-piperidinoj-propiofenon-maleát D vegyület: 3-(3aífa,4béta-dimetil-1 -fenil-etil-4alfa-piperidü)-fenol-hidroklorid E vegyület: naxolon F vegyület: naltrexon

I. táblázat

Opioid receptor kötési helyettesítési kísérlet

Vizsgált vegyület Kj Ki

példaszáma Mű(nm) Kappa(nm)

1 1,10 5,20

2 5,61 5,79

Vizsgált vegyület példaszáma

Ki

Mű(nm)

Ki

Kappa(nm)

3

2,95 ± 1,12

13,89 ± 6,66

4

0,46 ±0,20

6,04 ± 0,44

5

12,06

1,04

7

0,62

—

8

0,37 ± 0,07

3,41 ±0,08

9

0,49

2,34

11

0,65 ± 0,12

2,32 ± 0.26

12

4,33

—

13

1,25 ± 0,40

9,43 ± 1,67

14

31,75

70,10

15

0,84

0,55

16

0,41

5,47

19

1,61--20

0,29

9,62

21

0,41 ± 0,09

2,02 ± 0,46

22

1,40 ± 0,61

11,45 ± 4,29

23

2,40 ± 0,61

11,45 ± 4,29

24

2,24 ± 0,17

14,29 ± 2,10

25

0,22 ± 0,03

5,04 ± 0,58

26

0,89

1,91

27

1,36

3,04

29

0,77

3,82

33

0,56

6,10

34

0,20 ±0,08

3,29 ± 1,02

35

1,78 ± 0,10

12,47 ± 1,34

36

5,28

—

38

0,50

11,70

39

—

10,30

A vegyület

1,0

22,7

B vegyület

80,0

833,0

C vegyület

5,4

208,0

D vegyület

1,2

51,0

E vegyület

6,3

66,4

F vegyület

0,8

3,8

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vivo ugyancsak kiváló aktivitást mutatnak mű és kappa receptorok blokkolásában egerek esetében. Az aktivitást az alábbi vizsgálat szerint határoztukmeg.

A találmány szerinti vegyületek in vivo opioid receptor antagonista hatását egereken az általában fájdalomcsillapító hatás meghatározására alkalmazott vonaglási tesztvizsgálattal határoztuk meg. Az egér rángási válaszát a hasi izmok összehúzódásából állapítottuk meg, amelyet a hátsó végtag kinyúlása követett. A rángást 0,6 % ecetsav 1 ml/100 g testtömeg adagban történő intraperitoneális adagolásával idéztük elő. Öt hím CF-1 (Charles River, Protage, MI) egeret vizsgáltunk, amelyek körülbelül 20-22 g tömegűek voltak, és amelyeket előzetesen egy éjjelen át éheztettünk. Körülbelül 10 percig végeztük a rángási megfigyeléseket, amelyeket az ecetsav beinjektálása után öt perccel kezdtünk. A rángásban kifejtett százalékos gátlási értéket a kontroll csoport átlagos rángásaival összehasonlítva határoztuk meg. Minden egyes dózisértéket

5-5 egérnek adagoltuk.

5

10

16

20

25

30

35

40

45

50

55

60

11