202406. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Lumbricidae családba tartozó gilisztafélékből eikozapentaénsav-észter tartalmú zsír elegy - és adott esetben ebből eikozapentaénsav tartalmú zsírsav elegy - előállítására
1 HU 202406 A 2 állatokat - szárazanyag tömegükre számítva - 0,1-1,5 tömeg % enzimmel, előnyösen proteáz és/vagy foszfolipáz-C enzimmel, kezeljük 1-4 órán át, az így előkezelt masszát szárítjuk, őröljük, majd szerves zsíroldószerrel extraháljuk vagy szén-dioxidos szuperkritikus extrakciónak vetjük alá, ezután az extrakciós maradékot az extraktumtól elkülönítjük és az extraktumot ismert módon oldószermentesítjük, majd kívánt esetben a zsírelegyből a zsírsavakat ismert módon felszabadítjuk és az eikozapentaénsav tartalmat dúsítjuk. Az enzimes kezelés utáni szárítás történhet 80- 100 °C-on való hőkezeléssel, liofilizálással, porlasztva szárítással, stb. Szerves zsíroldó szerként előnyösen kloroform:metanol 2:1 tömegarányú elegyét alkalmazzuk. A zsírelegyből a zsírsavakat célszerűen lúgos bontással szabadítjuk fel. A zsírsav elegy EPA tartalmát pedig előnyösen az ismert karbamid-addukt képzés révén dúsítjuk. A módszert H.P. Kaufman: „Analyse der Fette und Ferrprodukte” című könyvében ismerteti (I. kötet, 76. oldal, Springer Verlag, 1958), de leírják a 4.377.526 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban is. A módszer lényege az, hogy a telített vagy a monoéndién zsírsavak karbamiddal adduktot (komplexet) képeznek, amely csapadék formájában leválik. A nagyobb mértékben telítetlen zsírsavak nem képeznek adduktot a karbamiddal. A találmány szerinti eljárás egyik terméke az Epaészter-ben dús zsírelegy vagy az EPA-ban dús zsírsav elegy. Ezt az olaj terméket célszerűen kapszulában vagy élelmiszerbe keverve hozzuk forgalomba. Az EPA-ban dús, olajtartalmú kapszulát vagy adalékolt élelmiszert előnyösen gyógyászati célra a koleszterin lerakódás mérséklésére, érszűkület, érelmeszesedés, érelzáródás mérséklésére, bizonyos bőrgyulladások kezelésére alkalmazhatjuk. A találmány szerinti eljárásban keletkezett fehérjében dús extrakciós maradék pedig az oldószermentesítés után, előnyösen takarmányként használható, mivel a fehérjéket előbontott, előemésztett állapotban tartalmazza. A szilárd maradék oldószermentesítése célszerűen 40-50 °C-on végzett szárítással történik. A találmány szerinti eljárás előnyei a következők:- A giliszta-feldolgozás mindkét terméke jól hasznosítható, értékes anyag.- A feldolgozás során hulladékanyag nem keletkezik.- A kinyert zsírelegy magas EPA-tartalmú. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal mutatjuk be. /. példa Élő gilisztát (Eisenia foeitida-t) dobszitán a komposztból elkülönítünk. Az így nyert 100 tömegrész giliszta tömeget vízzel mossuk, majd a mosott gilisztát 48 órán át nedves papírok között tartjuk 6 "C-on, ezalatt bélcsatomájük kiürül. Az így kapott masszát 4 tömegrész 0,2 M-os vizes foszfátpufferoldatba helyezzük, amely 3 tömeg % proteáz enzimet tartalmaz. A foszfát puffer pH-ja 7,6 és KH2P04 és K2HP04 elegyét tartalmazza. Az enzimes emésztést 30 °C-on 2,5 óra hosszáig végezzük. Az előkezelt gilisztamasszát ezután az oldatból elkülönítjük, majd 5 cm-es rétegvastagságban tálcákra terítve szárítószekrényben 95 “C-on 24 óráig, a tömegállandóság eléréséig, szárítjuk. így 17 tömegrész száraz tömeget kapunk, amelyet 0,9 mm átlag szemcseméretre őriünk. Az őrölt masszához 1,5 tömegrész kloroform:metanol 2:1 tömegarányú elegyét adjuk. Az extrakciós elegyet 3 órán át állni hagyjuk, keverés mellett. Az extraktumot a szilárd maradéktól szűréssel elkülönítjük, majd bepároljuk. A szilárd maradékot pedig 50 "C-on szárítjuk. A bepárolt sűrítmény 1,5 tömegrész, amelynek 20 tömeg%-a EPA-glicerin-észter, 80%-a pedig egyéb telített és telítetlen zsírsavak-glicerin-észtere. A zsírelemzés eredménye az alábbi: Zsírsavak (glicerin-észter alakjában) Tömeg % 12:0-16:0 37,2 18:0 4,9 18:1 12,5 18:2 14,4 18:3 3,4 20:2 1,4 20:3 0,2 20:4 5,1 20:5 (EPA) 20,0 A zsírelegyet kapszulázzuk és táplálkozási kiegészítőként alkalmazzuk. A szilárd maradékot, amely 67,5 tömeg % lebontott fehérjét tartalmaz, takarmányozási célra használjuk. 2. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de extrahalószerként diklór-metánt használunk. Az így nyert, oldószermentesített 1,4 tömegrész zsírelegy EPA- észter tartalma 19,5 tömeg %. A zsírelegyben lévő zsírsavakat úgy szabadítjuk fel, hogy az 1,4 tömegrész olajat 14 tömegrész petroléterben oldjuk, hozzáadunk etanolban oldott kálium-hidroxidot és az elegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk 12 óra hosszáig. Ezután az elegyhez 18 tömegrész vizet adunk, homogenizáljuk az elegyet, majd a szétvált fázisokat szeparáljuk. A felső fázis a petroléteres fázis, amelyet szennyezett oldószerként gyűjtünk. Az alsó fázis tartalmazza a zsírsav- káliumsót. A fázis pH-ját HCl-val 4,0-re állítjuk be és a zsírsavakat így felszabadítjuk. A zsírsavakat a víztől petroléteres kirázással különítjük el. Párolással történő oldószermentesítés után nyerjük a zsírsavfázist. Ezután a 1,0 tömegrész elegyet 20 tömeg %-os metanolban oldunk. Ehhez hozzáadunk 6 tömegrész karbamidot 12 tömeg %-os metanolos oldat formájában. Az elegyet 3 °C-on állni hagyjuk 24 órán keresztül. Ekkor a karbamiddal a telített zsírsavak-, illetve a monoén, dién zsírsavak metil-észtere adduktot képez és a rendszerből kikristályosodik. A kristályokat hűtés mellett leszűrjük. A szűrletet vízzel hígítjuk, majd a zsírsavakat petroléterrel kirázzuk. Az oldószermentesítés után olyan zsírsav elegyet nyerünk, amelynek 64 tömeg %-a EPA, illetve egyéb omega-3 zsírsav. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
