202324. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükóz meghatározására alkalmas diagnosztikai reagens előállítására
3 HU 202 324 B 4 1. sz. táblázat A glükóz mérés találmány szerinti kivitelezésének mérési karakterisztikája Koncentráció 2,5 (mmól/1) 5,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0 N 5 5 5 5 5 5 5 5 Y 2,60 5,02 15,03 20,00 24,92 29,87 34,83 38,76 SD ±0,04 ±0,05 ±0,07 ±0,09 ±0,07 ±0,10 ±0,23 ±0,49 Regresszió egyenlete: Y = 0,993 x + 0,100 mmól/1 N: mérésszám az adott koncentrációnál; Y: számtani középérték; SD: szórás; (Mivel a mérések 10,0 mmól/l-es standardra voltak kalibrálva, ez a koncentráció sem az adatok között, sem a regresszió analízisben nem szerepel.) Találmányunk szerinti reagens Linearitás felső határa: 35 mmól/1 Fi = linearitás „f ’ próbája: 0,4728 R = korrelációs koefficiens: 0,99995 Sh = egyenes körüli szórás: 0,09 mmól/1 188 953 sz. magyar szabadalom alkoholos reagense 20 33 mmól/1 Ufm 25 0,9998 0,09 mmól/1 A glükóz mérés felső határa azonban az új reagens- 30 sei a gyakorlatban kiterjeszthető 40 mmól/1 értékig, mert a regresszióból származó adatok szerint az alámérés csak 1,4%. 4. Találmányunk szerinti új reagens elkészítése egyszerűbb és olcsóbb (a jelenlegi árakon számítva mi- 35 nimum 10%-kal csökkenthetők a költségek), valamint a reagens polisztiiol küvettákban is használható, így bármilyen analizátorban is alkalmazható. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban mu- 40 tatjuk be: 1. példa Glükóz meghatározás vér szérumból manuálisan 45 1. oldat: 1000 ml alapoldatban, aminek pH-ja: 7,5, 10 400 NE glükózoxidázt és 15 600 NE peroxidázt oldunk fel. 2. oldat: 9,75 g timolt oldunk fel 125 ml aceton, 145 ml 50 Tween 20 és 730 ml desztillált víz keverékében. Felhasználás előtt az oldatokból 100 : 4 arányban keverve munkareagenst készítünk. Standard oldat: 10,0 mmól/1 glükóz, hidegen telített bcnzoesav vizes oldatában. 55 MEGHATÁROZÁS Kémcsövekbe 2,5-2,5 ml munkareagenshez 20 pl standard oldatot, illetve a további kémcsövekbe 20 pl vérszérumot mérünk. Az anyagokat elkeverjük, majd állni 60 hagyjuk 37 "C-on 15 percig, szobahőfokon 30 percig. Az előbbi esetben 10 perc lehűlést idő után spektrofotométeren vakreagenssel szemben 475 nm-nél leolvassuk az extinkciókat. Számítás: a vérszérum glükóz tartalma mmól/l-ben: 65 Minta extinkció Standard extinkció x 10 Az eljárás 0-35 mmól/1 tartományban lineáris. 2. példa Glükóz meghatározás vérszérumból Hitachi analizátoron A munkareagens készítése az 1. példa szerint történik, melyet a Hitachi analizátor R! jelű edényébe töltünk. Hűtőtárolás mellett két hétig eltartható. Slandardizálás: 10,0 mmól/1 töménységű glükóz oldattal. A szükséges standard és szérum mennyisége: 3 pl, munkareagens: 350 pl. Program: (37 'Q Assay code (1 point) 1-32-0 Sample volume (pl) 3 R, volume (pi) 350-50-0 R2 volume (pi) 0-20-0 Wavelenght (nm) 660-480 Calib. method 1-0 Std. 1 cone. pcs. 1-0 Unit mmól/1 SD limit 0,1 Duplicate limit 100 Sensitivity limit 0 Abs. limit gN/DE) 0-0 Prozon limit 0 Expected value 4,0-6,1 Instrument factor 1,00 3. példa G lükóz meghatározás, egyben valódiság vizsgálat, megadott glükóz tartalmú kontroll savó bemérésével: Az adott kontroll savó „Calibrator”, gyártója: Boehringer GmbH, NSZK. Lot N°: 159125, megadott glükóz értéke: 6,99 mmól/1, hexokináz eljárással bemérve. Visszakapott értéke az új reagenssel, a 2. példa szerint Hitachi analizátoron: n = 10 x = 6,94 mmól/1 Sd = 0,05 mmól/1 CV% = 0,64 T% = -0,71, ahol: n = a mérések száma; x = számtani áüag; SD = szórás; CV = variációs koefficiens; T = torzítás. 3
