202323. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prosztaglandin E2 tartalom radioimmunológiai meghatározására
7 HU 202 323 B 8 rifugáljuk. Ezután a felülúszókból alkalmas mérőcsövekbe 0,5 ml-t pipetlázunk, és ezek radioaktivitását NaI(Tl) szcintillációs kristállyal ellátott automatikus mintaváltó berendezésen (pl. Minigamma, LKB, Svédország gyártmány) megmérjük. A számítást a radioimmun meghatározásoknál szokásos módon végezzük. SZABADALMI IGÉNYPONTOK I. Eljárás biológiai minta prosztaglandin E2 (továbbiakban PGEj) tartalmának antigén-antitest reakciójával történő meghatározására ismert mennyiségű, hígítási sorozat szerint különböző PGEj koncentrációjú standard oldatok, specifikus antitest és nagy fajlagos aktivitású jód- 125-izotóppal jelzett prosztaglandin Ej-monojód-tirozinmetilészter (továbbiakban 125I-PGE2-TME) mint nyomjelző anyag (továbbiakban tracer) felhasználásával, melynek során megmérjük a tracemek specifikus antitesttel való kötődését az ismert mennyiségű, pufferoldattal készített hígítási sorozat szerint különböző koncentrációjú PGE2 standard oldatok és a meghatározandó minták jelenlétében majd a standard koncentrációkhoz tartozó kötésváltozások ismeretében a mintákhoz tartozó kötésváltozások alapján számítjuk a mindenkori közegminta hatóanyagtaritalmát, azzal jellemezve, hogy a specifikus antitestet első lépésben a PGEj hígítási sorozattal és a mindenkori közegmintával reagáltatjuk, előnyösen a kötési egyensúly eléréséig, az így kapott reakcióelegyhez hozzáadjuk a tracert, majd az elegyet az egyensúly eléréséhez szükséges időnél rövidebb ideig reagáltatjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy specifikus antitestként anti-PGE2 antiplazmát, előnyösen nyúl antiplazmát használunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypontok szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antitestet olyan koncentrációban alkalmazzuk, amely a tracer 15-50%-át, előnyösen 25- 40%-át képes megkötni. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inaktív ligandumot az antitesttel 10-40 órán át, előnyösen 16-24 órán át, a tracert az antitesttel 0,5-6 órán át, előnyösen 1-2 órán át reagáltatjuk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antitestet az inaktív ligandummal és a tracerrel 0 és 20 ‘C, előnyösen 0 és 5 "C közötti hőmérsékleten reagáltatjuk. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy háromezer és százezer, előnyösen harmincezer és ötvenezet cpm közötti beütésszámú tracert alkalmazunk. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pufferoldatként előnyösen zselatint tartalmazó foszfát puffert alkalmazunk, melynek pH-ja 6-9, előnyösen 7,0-7,5, koncentrációja 0,01- 0,2 mól/liter, előnyösen 0,05-0,1 mól/liter közötti. 5 10 15 20 25 5
