202289. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7alfa-acil-oxi-6béta-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo [3.3.0]-oktán-3-on-származékok racemát-hasítására sztereospecifikus enzimes acilát-hidrolízissel
3 4 HU 202289 B ként HPLC vagy vékonyréteg-kromatográfiás gyorsanalízisek (Merck, Darmstadt szilikagél lemezek; kifejlesztés diklór-metán:aceton=l:l eleggyel és előhívás kénsavval) megfelelők. A reakciót megszakítjuk, és az elegyet 5 feldolgozzuk, amint a bevitt racém kiindulási anyag 50X-a átalakult. A találmány szerinti eljárás különösen a (±)-J és a (±)-2 képletekkel ábrázolt prosztaglandin intermedierek sztereospecifikus 10 hidrolízisére megfelelő. A kővetkező kiviteli példák a találmány szerinti eljárás részletesebb szemléltetését szolgálják; a példákban megadott kitermelési adatokat az enzimesen át nem alakítható 15 enantiomerekre vonatkoztatva adjuk meg. 1. példa 20 300 mg (±)-7oC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont oldunk 9 ml etanolban, és 750 mg alkalikus proteinóz (Nagasa cég) 100 ml 0,1 mólos 7 pH-jú foszfótpufferral készített oldatával elegyítjük. Az 25 oldatot 28 °C-on körkörös rázógéppel rázatjuk, közben a reakció menetét folyamatosan kivett minták analízise útján követjük. 19 óra reakcióidő után a beadagolt kiindulási anyag 50%-a átalakul. Az elegyet ezután 30 3x50 ml metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, mire az ótalakulatlan benzoát a metil-izobutil-ketonos fázisba megy ét, míg az elhidrolizólt vegyület a vizes fázisban marad. A metil-izobutil-ketonos extraktumokat 35 egyesitjük, és vákuumban szárazra pároljuk. A kapott maradékot acetonból átkristályosítjuk. így 135 mg (90X) (-)-7oC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 116-117 °C, 40 és fajlagos forgatóképessége: [cCId^-SO.ö0 (c=l,050; kloroform). 2. példa 45 300 mg (±)-7cC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont 100 ml 0,1 mólos 7 pH-jú foszfátpufferban szuszpendálunk, hozzáadunk 750 mg Bacillus subtilis- 50 bői származó szubtilizint (Boehringer Mannheim cég), és az elegyet Ultra-Turrax-szal homogenizáljuk. Utána a szuszpenziót 28 °C-on 16 óra hosszat rózatjuk körkörös rázógéppel, mire a beadott racém kiindulási 55 anyag 50X-a elhidrolizálódik. Az elegyet vizsugár-vákuumban szárazra pároljuk, a kapott maradékot metanollal háromszor eluáljuk, az egyesitett metanolos eluátumokat ismét Bzárazra pároljuk, és szilikagéllel tőlött oszlopon diklór-metónraceton (66:33) eleggyel eluálva kromatografáljuk. Az elsőként eluálódó 1. frakció 122 mg (81,3X) (-)-7cC-benzoil-oxi-6ű-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo(3.3.0]oktán-3- -ont tartalmaz, amelynek olvadáspontja 114— -116 °C, és fajlagos forgatóképessége: [oC}n=-82,3° (c=l,015; metanol). 3. példa A 2. példában leirt körülmények között 300 mg (±)-7oC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]-oktán-3-ont 7 pH-jú foszfótpufferben 750 mg .Sclerotinia' lipázzal (Nagase cég) 28 °C-on 64 óra hosszat kezelünk. Az elhidrolizált nem természetes konfigurációjú enantiomer oszlopkromatográfiás elválasztása után 115 mg (76,7X) 115-116 °C olvadáspontú (- )-7oC-benzoil-oxi-6/3-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0 Joktán-3-on kapunk, amelynek fajlagos forgatása : [oC]d=-79,8° (c=l,02; metanol). 4. példa A 2. példában leirt körülmények között 300 mg (±)-7cC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktén-3-ont 7 pH-jú foszfátpufferben 28 °C-on 750 mg Alcalase T proteázkészítménnyel (NOVO cég) 40 óra hosszat hidrolizálunk. A reakcióelegy oszlopkromatográfiás szétválasztása után 142 mg (94,7X) (-)- 7cC- benzoil-oxi- 6ß- {hid roxi- me til )-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont kapunk, amelynek olvadáspontja 112-114 °C, és fajlagos forgatóképessége: [cC]d=-77,1° (c=l,005; metanol). 5. példa A 2. példában leirt körülmények között 300 mg (±)-7cC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont 7 pH-jú foszfátpufferben 750 mg Bacillus subtilis eredetű proteázzal 28 °C-on 15 óra hosszat kezelünk. A reakcióelegy oszlopkromatográfiás szétválasztása utón 119 mg (76,3X) 113-115 °C olvadáspontú (- )-7oC-benzoil-oxi-6ß-(hidroxi-metil)-2-oxabiciklo[3.3.0]oktán-3-ont kapunk, amelynek fajlagos forgatóképessége: [oC)d=-78,9° (c=l,025; metanol). 4
