202288. lajstromszámú szabadalom • Eljárás trombin-inhibitorok előállítására

6

5

HU 202288 B

RII, Bam HI, Hpa II, Pst I, Hinf I vagy Hind III.

A találmány eljárás különösen olyan (I) általános képletű nukleotidszekvenciából és a komplementer nukleotidszekvenciából álló kettős szálú DNS előállítására - ahol a képletben a nukleotidszekvenciát az 5'-végtől kezdődően tüntettük fel és jobb megértés kedvéért megadtuk a triplettek által kódolt aminosavakat, és ahol

A

dezoxiaderiozil

T

timidil

G

dezoxiguanozil

C

dezoxicitidil

X

A, T, C vagy G,

Y

T vagy C,

Z

A, T, C vagy G, ha Y = C,

vagy

Z = A vagy G, ha Y = T,

Q

T vagy A

R

C és S = A, T, C vagy G, ha Q =

vagy

R = G és S = T vagy C, ha Q = A,

M

A vagy G,

L

A vagy C,

N

T, C vagy A

K

A vagy G, ha M = A,

vagy

K = A, ha M = G,

jelentésű és (X’)n és (X*)« egyenként olyan tetszés szerinti nukleotidszekvenciákat jelentenek, amelyekben n és m nagyobb, mint 3 és kisebb, mint 100, különösen nagyobb, mint 5 és kisebb, mint 15 - amelyet egy restrikciós enzim képes felismerni és elhasítani.

A találmány egyik előnyös kiviteli formájában a DNS-szekvencia az 5’-végen Eco RI-gyel hasítható, a közepén Eco RII-vel hasítható és a 3’-végen Bam HI-gyel hasítható 5 nukleotidszekvenciát tartalmaz.

A találmány elsősorban olyan kettős szálú DNS-re vonatkozik, amely a hirudin aminosavait kódoló E.coli által előnyben részesített tripletteket tartalmaz. Ilyen triplet- 10 tek a követezők:

glicin (gly)

GGT

cisztein (cys)

TGC

valin (val)

GTT

leucin (leu)

CTG

szerin (ser)

TCT

treonin (tht)

ACC

fenilalanin (phe)

TTC

tirozin (tyr)

TAC

metionin (met)

ATG

aszparaginsav (asp)

GAC

glutaminsav (glu)

GAA

lizin (lys)

AAA

izoleucin (ile)

ATC

hisztidin (his)

CAC

prolin (pro)

CCG

glutamin (gin)

CAG

aszparagin (asn)

AAC

Előnyös stopjel (NON) a TAG kodon.

A fenti módon a hirudin aminoszekven- 30 ciájét kódoló gén előnyös kiviteli formája a (II) általános képletű DNS, ahol a képletben

MetValValTyrThrAspCysThrGluSerGlyClnAsnLeuCysLeuCysGluGly CTGGAATTCATGGTTGTTTACACCGACTGCACCGAATCTGGTCAGAACCTGTGCCTGTGCGAAGGT GACCTTAAGTACCAACAAATGTGGCTGACGTGGCTTAGACCAGTCTTGGACACGGACACGCTTCCA (EcoRI)

SerASnValCysGlyGlnGlyAsnLysCysIleLeuGlySerAspGlyGluLysAsnGlnCysVal

TCTAACGTTTGCGGTCAGGGTAACAAATGCATCCTGGGTTCTGACGGTGAAAAAAACCAGTGCGTT

AGATTGCAAACGCCAGTCCCATTGTTTACGTAGGACCCAAGACTGCCACTTTTTTTGGTCACGCAA

(EcoRII)

ThrGlyGluGlyThrProLysProGlnSerHisAsnAspGlyAspPheGluGluIleProGluGlu

ACCGGTGAAGGTACCCCGAAACCGCAGTCTCACAACGACGGTGACTTCGAAGAAATCCCGGAAGAA

TGGCCACTTCCATGGGGCTTTGGCGTCAGAGTGTTGCTGCCACTGAAGCTTCTTTAGGGCCTTCTT

TyrLeuGlnNON

TACCTGCAGTAGGATCCTG

ATGGACGTCATCCTAGGAC

(BamHI)

o