202236. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid vegyületek előállítására
1 HU 202 236 B 2 A találmány tárgya új eljárás az (1) általános képletű vegyületek előállítására. A képletben R1 jelentése mctil-, etil- vagy izopropilcsoport. Ezeket a vegyületeket a 2 176 182 számú nagy-britanniai és az ennek megfelelő 904 709 számú belga szabadalmi leírásban, valamint a 238 258 számú európai szabadalmi leírásban írják le. A 2 176 182 számú nagy-britanniai szabadalom szerinti eljárás hozamát a találmány szerinti eljárás hozama több mint 30%-kal haladja meg. Emellett a találmány szerinti eljárás reakcióideje lényegesen rövidebb, 1,25 óra, míg a fenti publikációban szereplő eljárásé 40 óra az anterioritás 70. példáját a találmány szerinti eljárás 1. példájához hasonlítva. A találmány szerinti eljárás lényeges különbsége az anterioritás szerintihez képest a fázistranszfer katalizátor használatában áll. A 238 258 számú európai szabadalmi leírásban szereplő eljáráshoz (5-hidroxi-23-oxo-származék oxidálása etanolban mangándioxiddal) képest a találmány szerinti eljárás hozama némileg alacsonyabb ugyan, de a szükséges reakcióidő lényegesen alacsonyabb, így a találmány szerinti eljárás összesített hatékonysága jobb az anterioritás szerintinél, ami az ipari méretű megvalósításnál komoly jelentőséggel bír. Ezek a vegyületek parazilacllcncs és antibiotikus aktivitásúak, különösen endoparaziták, ektoparaziták és gombák ellen hatásosak, inszekűeid, ncmatocid és akárkid hatással bírnak, valamint hatásosak állatok és ember parazitáinak pusztítására, továbbá a mezőgazdaságban, kertészetben, erdőgazdaságban, közegészségügyben és termékek tárolása során előforduló rovarkártevők pusztítására. Ezek a vegyületek továbbá más aktív vegyületek előállításának hasznos köztitermékei is. A találmány szerinti vegyületek biológiai hatását a 2 176 182 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás ismerteti. A találmány szerinti eljárásban az (I) általános képlctű vegyületeket új módon állítjuk elő fermentált kiindulási anyagokból. Az eljárás könnyen alkalmazható és jó hozammal hajtható végre. Az (I) általános képletű vegyületeket a (II) általános képletű vegyületek - R1 jelentése az előzőekben megadott - fázistranszfer katalizátor jelenlétében végzett oxidálásával állítjuk elő. A reagáltatást végezhetjük például króm(VI)-vegyület oxidálószerrel, például nátrium- vagy piridiniumdikromáttal. Fázistranszfer katalizátorként alkalmazhatunk például olyan vegyületeket, amelyek jól használhatók a fenti oxidálószerekkel, így például tetraalkil-ammónium-sókat, így tetra(n-butil)-ammónium-sót, például tetra(n-butil)-ammónium-hidrogén-szulfátot. A reagáltatást célszerűen megfelelő oldószerben, például valamely észterben, így etil-acetátban hajtjuk végre és előnyösen erős savat, például ásványi savat, így kénsavat alkalmazunk a reakcióban. A reagáltatást -80 °C és +50 *C közötti, például 0 °C hőmérsékleten hajthatjuk végre. A (II) általános képletű vegyületek előállíthatok a Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 vagy mutánsának tenyésztésével és a kapott vegyületnek a fermentléből való elkülönítésével. A Streptomyces organizmus szokásos eljárással tenyészthető, azaz asszimilálható szén- és nitrogénforrás, valamint ásványi sók jelenlétében. Az asszimilálható szén- és nitrogénfonás, valamint az ásványi anyagok alkalmazhatók egyszerű vagy komplex tápközegek formájában, mint amilyeneket például a 2166 436A számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetnek. A Streptomyces organizmust általában 20 és 50 "C közötti, előnyösen 25 és 40 °C közötti hőmérsékleten tenyésztik, a tenyésztéshez levegőztetés és keverés, például rázás vagy keverővei való keverés szükséges. A tápközeget először kis mennyiségű spórás mikroorganizmus szuszpenzióval oltják be, de a szaporodás lag fázisának elkerülésére készíthető az organizmusból vegetatív inokulum oly módon, hogy a tápközeg kis mennyiségét a spórás organizmussal beoltják és a kapott vegetatív inokulumot viszik a fermentációs tápba, vagy még előnyösebben még egy vagy több oltóanyagkészítési szakaszt iktatnak be, amelyekben további szaporodás történik, majd ezt az oltóanyagot viszik a főfermentáció táptalajába. A fermentálás általában 5,5 és 8,5 közötti pH-n történik. A fermentálás 2-10 napig, például 5 nap körüli időtartamon át végezhető. A (II) általános képletű vegyületek a fermentléből ismert elkülönítési és szcparálási eljárásokkal elválaszthatók. Számos frakcionálási eljárás választható, például adszorpciós-eluciós eljárás, kicsapásos eljárás, frakciónál! kristályosítás, oldószeres extrahálás és folyadék-folyadék megosztás, amelyek számos módon kombinálhatok. A vegyülct elkülönítésére legcélszerűbbnek az oldószeres extrahálás, a két, egymással nem vagy csak részben elegyedő oldószer közötti megosztás és a kromatografálás bizonyult. A (II) általános képletű vegyületek fenti módszerekkel való megfelelő előállítási eljárását a 2 187 742A számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetik. A továbbiakban a találmányt példával ismertetjük, a példa nem korlátozó jellegű. Azt az egyébként (II) általános képletnek megfelelő vegyületet, amelyben R1 jelentése izopropilcsoport és az 5-ös helyzetben oxocsoport helyett hidroxilcsoportot tartalmaz, a továbbiakban A faktor névvel jelöljük. Az A faktor 5-kcto-származékának előállítását a 2 187 742A számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetik. 1. példa 5,23-Diketo A faktor előállítása 200 mg 5-kcto A faktor és 15 mg tetrabutil-ammónium-hidrogén-szulfát 4 ml etil-acetátban készült jéghideg oldatához erős keverés közben 15 perc alatt hozzáadjuk 1,2 ml tömény kénsav és 120 mg nátrium-dikromát 2 ml vízzel készült jéghideg oldatát. 1 óra múlva az elegyet etil-acetáttal meghígítjuk, és a szerves fázist telített vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk, szárítjuk, majd lepároljuk róla az oldószert. A kapott gumiszerű anyagot kromatográfiás eljárással tisztítjuk 100 ml Merck Kieselgel 60-on (0,037^0,062 mm). Elucnsként 10%-os diklór-mctános etil-acetátot alkalmazunk. így 86 mg cím szerinti vegyületet nyerünk halványsárga hab formájában. 8 (CDC13) többek között 6,57 (m, 1H), 2,50 (s, 2H), és 1,89 (m, 3H). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek előállítására - a képletben R1 jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport -5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
