202111. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként (R)-(E)-4-(3-foszfono-2-propenil)-2-piperazinkarbonsavat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 202111B A koponyát feltártuk, és elektródokat ültettünk be: 2 EEG-f elvevő elektródot szúrtunk be a homlok! kéreg felett (amelynek koordinátái: laterálisán 2 mm, és mellső irányban, a koponyatetőtől 2 mm), 2 elektródot a nyakszirti kéregállomány felett (laterálisán 2 mm, és mellső irányban 2 mm távolságban a lambdától), valamint egy közömbös elektródot a kisagy felett (lateriálisan 0,5 mm és hátsó irányban 2 mm távolságban a lambdától) és egy elektródot a nyakizomzatban elektromiogramm (EMG) felvétele céljából. Minden esetben ezüstözött sárgarézcsavarokat alkalmaztunk elektródokként, amelyek csavarorsóhossza 2,5 mm, a csavar átmérője 0,65 mm és a csavarfej átmérője 1,5 mm volt. Az elektródokat csupán 1 mm mélységig szúrtuk be. Ezeket az elektródokat ezüstdrótokkal kötöttük össze egy minidugasz érintkezőivel. E műveletek után a koponyát, az elektródokat és a minidugaszt metU-metakrüáttal fedtük (Paladur, a Kulzer-cég terméke, Bad Homburg, NSZK). A seb bevarrása után a patkányba szubkután úton 0,1 ml sztreptomicin-szulfátot (690 egység/mg, a Sigma AG cég terméke) fecskendeztünk be. A felvételeket az elektródák beültetése után 7-8 hónappal végeztük. A felvételek időtartama alatt a patkányokat ugyanazokban a ketrecekben tartottuk, mint a felvételek közötti időben, azonban ketrecük köré egy külső dobozt helyeztünk, a külső elektromos és akusztikus zavarok kiküszöbölése végett. Az állatokat 24-órás világos-sötét ciklusban tartottuk (8 órától 20 óráig tartó megvilágítással) 22 ± 3 “C környezeti hőmérsékleten, 40-70% páratartalmú környezetben. Az állatok vizet és táplálékot ad libitum fogyaszthattak. Az EEG-f elvételeket a négy patkányon egyidejűleg készítettük egy 16-csatomás Minograph EEG műszerrel (a Siemcns-cég gyártmánya). Minden egyes patkányról monopoláris felvételt készítettünk a jobboldali homloki és nyakszirti kéregállományról, valamint EMGfelvé telt a hátsó nyakizomzatról. További nyakszirti felvételt kaptunk 10 Hz felett. Az EMG felvételt frekvencia-fcszültség-átalakítóval transzformáltuk. A hatóanyag adagolása előtt 4 nappal a patkányoknak gyomorszondán át, orálisan 5 ml/kg csapvizet adtunk. Ugyanezeket a patkányokat ezután 3-4-naponként egyszer gyomorszondán át az (I) képletű vegyület desztillált vízben oldott növekvő adagjaival kezeltük. Ezeket a kezeléseket a tiszta oldatokkal mindig a felvétel előtt 15 perccel végeztük. A felvételeket 6 órán át (órától 15 óráig) készítettük, és ezt követően egy számítógép (EBMXTModel 286 típusú személyi számítógép) segítségével egymást követő 8 másodperces időközökben EEG és EMG energiaspektrumokat származtattunk, és ezeket gyors Fouriertranszformációnak vetettünk alá (kezdeti feloldás: 0,25 Hz). Közvetlenül a kísérlet után az EEG-adatokat 1-32 Hz tartományra terjedőfrekvenciasávokra redukáltuk. A redukált energiaspektrumok segítségével az ébrenlét és alvás alábbi fázisait különböztettük meg: 1) ébrenlét aktív EMG-vel (I. ébrenléti fázis); 2) ébrenlét aktív EMG nélkül (II. ébrenléti fázis); 3) klasszikus I. alvási fázis; 4) klasszikus n. alvási fázis; és 5) paradox alvási fázis. 3 Minden egyes állat egyszersmind saját kontrollja szerepét is játszotta. Az (I) képletű vegyületet orálisan, 3,210 és 32 mg/kg mennyiségben adagoltuk. Az első 3 óra alatt - 3,2 mg/kg mennyiségű hatóanyag orális adagolása után - a paradox alvás fázisa jelentősen megnövekedett, és megfigyelhető volt a klasszikus H. alvási fázis eltolódása a klasszikus I. alvási fázis irányában. 10 mg/kg hatóanyag adagolása után az összes fázisok jelentős mértékben módosultak: az I. ébrenléti fázis és a klasszikus II. alvási fázis csökkent, viszont a klasszikusl. alvási fázis, a EL ébrenléti fázis és a paradox alvás fázisa növekedett. 3,2 mg/kg hatóanyag adagolása után 6 órával készített felvétel szerint a II. ébrenléti fázis kivételével az összes fázisok jelentősen módosultak: azl. ébrenléti fázis és a klasszikus n. alvási fázis csökken t, ezzel szemben a klasszikus I. alvási fázis és a paradox alvás fázisa növekedett. E hatások mennyiségi szempontból még kifejezettebbekké váltak 10, illetve 32 mg/kg hatóanyag adagolása után. A fentiek alapján az (I) képletű vegyület alvási zavarok kezelésére alkalmazható. Az ezen alkalmazási célra megfelelő adag természetesen függ például a hatóanyag befogadójától, az adagolás módjától, valamint a kezelendő állapot jellegétől és súlyosságától; állatokon azonban átalában kielégítő eredményeket érhetünk cl, ha naponta körülbelül 3-10 mg/kg hatóanyagot adagolunk. Nagyobb emlősállatok, például emberek esetében a javasolt napi dózis körülbelül 5-800 mg (I) képletű vegyület, amelyet célszerűen rövid idővel lefekvés előtt adagolunk. A találmány révén tehát lehetővé válik az (I) képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból elfogadható sójának az alkalmazása alvási zavarok kezelésére. A találmány továbbá módszert biztosít alvási zavarok kezelésére ilyen kezelésre szoruló egyéneken; e kezelési módszer abban áll, hogy ennek az egyénnek a számára az (I) képletű vegyület vagy gyógyászati szempontból elfogadható valamüyen sójának terápiásán hatásos mennyiségét adagoljuk. E só hatásosságának nagyságrendje a (I) képletű vegyület hatásának nagyságrendjével azonos. A találmány révén lehetővé válik továbbá hatóanyagként az (I) képletű vegyület vagy annak gyógyászati szempontból elfogadható valamüyen sóját tartalmazó gyógyászati készítmények előállítása alvási zavarok kezelésére. E gyógyászati készítmények a szokásos módon, például tabletta vagy oldat alakjában állíthatók elő. Az (I) képletű vegyületnek patkány homloki kéregállományában terjedő depressziót gátló hatását R. Marrancs és munkatársai módszerével vizsgáltuk (Brain Research 457,226/1988/). E vizsgálati módszer alkalmazása során az (I) képletű vegyület 3-30 mg/kg mennyiségben intrapcritoneálisan adagolva a terjedő depresszió küszöbértékét és terjedési idejét növelte, és a terjedő depresszió időtartamát csökkentette. Ennek alapján az (I) képletű vegyület migrén, például a klasszikus migrén kezelésére alkalmazható. Az ezen alkalmazási célra megfelelő adag természetesen például a hatóanyag befogadójától, az adagolás módjától, valamint a kezelendő állapot jcllegé-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
