202063. lajstromszámú szabadalom • Nyújtott hatású biológiai peszticidet tartalmazó készítmény és eljárás a hatóanyag és a termelő sejtek előállítására
HU 202063B fluorescens (pCH2.1)—NRRLB-15977 tenyészetletétek részévé váltak az NRRL letéti hely állandó gyűjteményének, ahol legalább 30 évig fenn kell tartani ezeket. Ezek a letétek a köz rendelkezésére állnak egy szabadalom oltalma alatt, amely magában 5 foglalja ezeket. A letétek rendelkezésre állnak, amint ezt a külföldi szabadalmi törvények előírják, azoknak az országoknak a számára is, ahová a szóban forgó bejelentésnek, vagy valamely származékának a megfelelő változatát benyújtották. Meg le- 10 hét érteni azonban, hogy a letét hozzáférhetősége nem ad jogot a szóban forgó találmány szerinti eljárás gyakorlatbavétcléhez a kormányközi eljárások által garantált szabadalmi jogok megsértésével. 15 5. példa Heterológ gént gazdaként befogadó mikrobák kezelése és vizsgálata APseudomonast elöljükvagy 1%-os lugolos jódoldattal(100gKI,50gl2,100ml jégecet 1 litersteril 20 desztillált vízben), vagy 2%-os formalin oldattal kezelve, mindkettőt szobahőmérsékleten végezve. A következő tanulmányban a sejtek elölésének különböző módszereit alkalmazzuk, hogy meghatá- 25 rozzuka hatást a sejt stabilitására ultrahangos kezelésnél. A P. fluorescens 33 törzs nem transzformált törzs, amely nem tartalmazza a Bacillus thüringiensís toxint, míg a pCH törzs tartalmazza a 2,1 kb-s toxingént.Azelsőtanulmánybana33.rözsésapCH 30 13 1. növényvizsgálat — P. fluorescens két literes tenyészetéből — Bacillus thüringiensis toxinnal vagy anélkül—származó sejtüledéket két részre osztunk. Asejtekfelétl%-os lugol-jódoldattal kezeljük 4 órán át, míg a másik felét jégen tartjuk. A mosott, lugollal kezelt sejteket és a nem kezelt sejteket újból szuszpenzióba visszük 10 ml steril, ionmentesí tett vízben. 9 ml üyen szuszpenziót (10E-10E12sejt/ml) háromfiatal salátára permetezzük. A három bepermetezett növényt egyedi, zárt kamrába helyezzük, és 50-75 Trichoplusia ni lárvát alkalmazunk a növényekhez. A növényeket akkor tekintjük védettnek, ha a levélzeten nincs látható veszteség a megfigyelési időtartam alatt. A következő tanulmányban újonnan kikelt káposztalepke-hernyókat helyezünk a biológiailag vizsgálni kívánt anyag cseppecskéit tartalmazó Pctri-csészébe. A lárvák felszívják a folyadékot, majd eltávolítjuk innen a lárvákat, és a lárvák étrendjét tartalmazó kis edénykékbe helyezzük ezeket. A lárvákat hét nap után megvizsgáljuk és az elpusztult állatok teljes számát rögzítjük. Az itt következő 4. táblázat mutatja be az eredményeket. törzs állandósult (stacioner fázisú készítményeit centrifugálással kinyerjük, és a sejtüledéket sterü, ionmentesített vízben szuszpendál juk 10El , illetve 10E9 koncentrációkra. Sejtek alikvotjait tesszük ki hőkezelésnek, 70 “C hőmérsékletű vízfürdőben különböző időtartamokon át, és a sejt életképességét King-féle B agaron végzett lemezszámlálással mér-14 P. fluorescens Mikroorganizmus Kezelés Élő mikroorganiz-Összes lárvák Védelem musok száma száma sejt/ml P. fluorescens P. fluorescens Élő 2.5.10E11 75 nem védett +Bacillus thüringiensis toxin Élő 3.1.10E11 75 védett P. fluorescens l%lugol-jódoldat, 4 óra 0 75 nem védett P. fluorescens l%lugol+Bacillus thüjódoldat, ringiensis toxin 4 óra 0 75 védett *Akísérleti elrendezés: 1 nap: 25 db 2 napos lárvát adunk a növényekhez; 3. nap: 50 db 5 napos lárvát adunk a növényekhez; 10. nap: elvégezzük a megfigyelést 4. táblázat 1. biológiai vizsgálat—P. fluorescens Mikroorganizmus Kezelés Elpusztult lárvák Elpusztult Élő sejtszáma/összes lárvák %-a szám/ml lárva P. fluorescens P. fluorescens Élő 0/15 0 8.10E11 +Bacillus thüringiensis toxin Élő 11/18 62 2.5.10E12 8
