202034. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetraploid és biszabololdús kamilla populációk előállítására
1 HU 202034 B 2 mennyi érték olyan virágfejekre vonatkozik, amelyeket 40 °C hőmérsékleten szárítottuk és amelyeket akkor arattunk le, amikor egy virágfej valamennyi csővirágának 30-70%-a ki volt nyílva.) Ezeket a növényeket klónoljuk. Ehhez a növényeket (klónolt anyanövényeket) először körülbelül 15 cm-es hajtáshosszra visszavágjuk, 8-10 órás naphossz mellett és 12-14 °C hőmérsékleten új hajtásokat (rövid oldalhajtásokat) hagyunk nőni. Körülbelül 100 % relatív légnedvességen, 15 °C léghőmérsékleten és 14 órás naphosszon a levágott rövid hajtásokat tőzeg és homok keverékében tartjuk és ezeket a dugványokat 7-14 nap alatt meggyökereztetjük. Az adott szokásos klónolás helyett (dugványos szaporítás) a növény osztódásképes szövetrészei invitro szaporításnak is kitehetők (úgynevezett meriztem-szaporítás). Egy kamilla-kultúra etablirozásához a növény különböző részei alkalmasak, főként a hajtáscsúcsok vagy a hónaljrügyek. A növények aszeptikus körülmények között laminárisán áramló (nagyteljesítményű lebegőanyag-szűrőn átbocsátóit, turbulenciamentesen áramló) H2O2- vel való leöblítése után a hónaljrügyek hajtáscsúcsait levágjuk és ezeket olyan reagensüvegekbe helyezzük át, amelyek egy táptalajjal, például Murashige és Skoog (Physiol. Plant. 15, 473-497, 1962.) táptalajjal vannak töltve. A reagensüvegeket olyan klímatérbe helyezzük, amelyekben a beállított naphossz 12-18 óra, előnyösen 16 óra (fluoreszkáló fénycsövekkel beállítva), a fényintenzitása 500-10 000 lux, előnyösen 1000-3000 lux és a hőmérséklet 15-30 “C, előnyösen 22-27 °C. Amikor a kiültetett növények jó növést mutatnak, ezeket az előzőekben ismertetett táptalajba helyezzük át, azonban ebben a táptalajban nagyobb a citokinin (a selejtosztódást elősegítő fitohormon) koncentráció (pl. 30 mg/1 6-izopentenil-adenin) és csak kevés vagy semmi az auxin (0-0,3 mg/1 indol-ecetsav) tartalom. A következőkben a tengelyek megnyúlnak és járulékos szervek, megnövekedett hónaljrügyek képződnek. Ezek az említett módon leszedhetők és tenyészthetők. A növényszaporításhoz való nagyobb számú szövettenyészeteket (3. szaporítási generáció) az első táptalajon a levelek kinövése és kialakulása után egy olyan táptalajba helyezzük át, amely 10 mg/1 indolecetsavat vagy 3-indol-vajsavat vagy 0,1-0,3 mg/1- naftil- ecetsavat tartalmaz. Itt a növénykék meggyökeresednek és körülbelül négy hét után sterilizált (12 óráig 120 °C hőmérsékleten gőzölt) kertifölddel töltött edényekbe ültetjük át ezeket és melegházban (a szokásos dugványszaporításhoz alkalmazott körülmények között) továbbneveljük. A Murashige és Skoog táptalajban a következő anyagok vannak: mg/1 mg/1 NH4NO3 400 Indol-ecetsav 2,0 Ca(N03)2.4H20 144 Furfuril-adanin 0,1 KNO3 80 Tiamin 0,1 KH2PO4 12,5 Nikotinsav 0,5 MgS04.7H20 72 Piridoxin 0,5 KC1 65 Glicin 2,0 NaFe-EDTA 25 Mio-inozit 100 H3BO3 1,6 Kasein-hidrolizátum 1000 mg/1 mg/1 MnSCMHaO 6,5 Szacharóz 2% ZnS04.7H20 2,7 tisztított KI 0,75 Agarpor 1% 2. művelet: Az 1. művelet során nyert növények melegházban, izolált körülmények között együtt virágzanak el. Itt a növények 11 cm-es edényekben állnak. Az edények kerti földdel vannak töltve és környezeti hőmérsékletük nappal 18-24 °C, éjjel 12-14 °C. A naphossz legalább 14 órás és ezt a téli félévben járulékos világítással (200 Watt/m2) érjük el. A vizet a szükségletnek megfelelően juttatjuk a növényekhez. A kiszelektált egyedek összességéből 4 héten keresztül folyamatosan azokat a virágfejeket szedjük le vetőmag nyerése céljából, amelyek már elvirágoztak és röviddel a szétesés előtt vannak. A szárítást jól átszellőző csarnokban 20-30 °C léghőmérsékleten végezzük, azután a vetőmagvakat réseit szita (5x0,4 mm) segítségével leszitáljuk és egy függőleges válogatón utántisztítjuk. 3. művelet: A 2. művelettel kapott vetőmagvakból szúrópróbaszerűen mintát veszünk és ebből körülbelül 2000 utódot termesztünk (az ökológiai körülmények ugyanazok, mint a 2. műveletnél), és az 1. művelet szerinti A)-D) ismérvek szerint szelektálást végzünk. Az így kiszelektált egyedekkel ezután a 2. művelet szerint járunk el. 4. művelet: A 3. művelet során nyert vetőmagból egy részt ősszel, két különböző helyen vetettünk el. I. termőhely adatai: 450 n NN, 48,5’ N/11,5’ 0, évi csapadékmennyiség 750 mm, nedves-mérsékelt klíma, Január -10-0 ’C, Július +10-1-20 °C. Az előbb használt jelek jelentései a következők: NN= északi normál nulla - tengerszint magasság, N’= északi szélesség, 0°= északi hosszúság. II. termőhely adatai: 200 m NN, 42° N/l* 0, évi csapadékmennyiség 400 mm, mediterrán klíma, Január 0-+10 °C, Július +20-+30 °C. A kivetést mindkét termőhelyen szeptember végén, illetve október elején végeztük. Az így nyert kísérleti állományt homogén növekedés, virágnagyság és aratási időpont szempontjából megvizsgáljuk és minősíttjük, ezenkívül a virágokból vett mintán ezeknek hatóanyag-tartalmát megvizsgáljuk. Az állományból újból kiszelektáljuk azokat az egyedeket, amelyek megfeleltek az 1. műveletnél föltüntetett paramétereknek. Ezekből a 2. művelet utólsó részének megfelelő módon vetőmagvakat nyerünk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
