202034. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetraploid és biszabololdús kamilla populációk előállítására
I HU 202034 B 2 hőmérsékleten és 12 és 14 °C közötti éjszakai hőmérsékleten ismét növényeket nevelünk és ezeket ismét egyidejű virágzási idő, egyenletes tőlevelű elágazás és 20 és 40 mm közötti virágfej nagyság, valamint legalább 100 mg % kamazulén, legalább 200 mg % biszabolol és kevesebb mint 50 mg % egyéb biszaboloid hatóanyag-tartalom szerint kiszelektáljuk, az így nyert növényeket az A. szerintiek szerint klónoljuk és az így kapott növényekből ismét vetőmagvakat nyerünk, és - egy diploid kamilla esetében - ezeket 0 és 25 °C közötti hőmérsékleten kémiai anyagokkal, 0 és 35 °C közötti hőmérsékleten gammasugarakkal, röntgensugarakkal és UV-sugarakkal, 33 és 50 °C közötti magas hőmérséklet segítségével, 0 és 5 'C közötti alacsony hőmérséklet segítségével, vagy lefejező kallusz eljárással tetraploidizáljuk, vagy portokkultúrás műveleteknek és ezt követő tetraploidizálásnak vetjük alá, és adott esetben az így kapott kamillanövényekből drogot és/vagy szaporítóanyagot nyerünk, oly módon, hogy a virágokat olyan vegetációs stádiumban aratjuk le, amikor egy virágfej csöves virágainak 30-100%-a nyitott és a virágokat 70 °C-ig terjedő léghőmérsékleten szárítjuk, mimellett szaporítóanyag kinyerésére az így kapott száraz virágfejeket szétmorzsoljuk és a szaporítóanyagot (magokat) kiszitáljuk. Az eljárás révén előállított új tetraploid kamilla az eddig ismert kamilla fajtákhoz viszonyítva meglepő módon egy sorozat új előnyös tulajdonsággal rendelkezik. E tulajdonságok közül az egyik legfontosabb, hogy az ismert DEGUMILL fajtától eltérően a természetben előforduló kamilla-populációkkal (vadkamillákkal) való beporzódásra már nem hajlamos. A találmány szerinti eljárással létrehozott kamilla az ismert diploid kamilláktól és tetraploid kamilla fajtáktól meglepő módon különbözik, mert fontos hatóanyag tartalma, az (-)-ct-biszabolol-tartalma igen magas (legalább 200 mg %), ugyanekkor a szokásos biszaboloidok (például biszaboloxidok) mennyisége nagyon csekély, kevesebb mint 50 mg %. Például az ismert és az irodalomban leírt kamilla fajták biszaboloxidok és részben biszabolonoxid tartalma igen magas, a gyógyszer éterikus olajának rendszerint körülbelül 50%-a (azaz 1% éterikus olajtartalomnál 100 g gyógyszerben körülbelül 500 mg). Ezenkívül a találmány szerinti kamilla az eddig ismert tetraploid kamilla fajtákhoz képest anyagtartalom szempontjából homogén, azaz a kamazulén és (-)-a-biszabolol-tartalma állandó (homozigót). Ezzel szemben az ismert tetraploid kamilla fajtáknál az egyes növényeken végzett vizsgálatok azt mutatják, hogy az egyes egyedek tartalom szempontjából különbözik, ami azzal a következménnyel jár, hogy az ezekből előállított gyógyszereken végzett mindegyik szúrópróba mind mennyiségi, mind minőségi szempontból eltérő, inhomogén eredményt ad. Ezen túlmenően a találmány szerinti eljárással létrehozott kamilla az eddig ismert tetraploid kamilla fajtáktól egy vagy több következő tulajdonság szempontjából különbözik: a magvak jobb csírázóképessége, a nem hasznosítható növénytömegből kevesebb hulladék keletkezik (azaz nagyobb a virág/nö vény tömeg arány, a virágoknak kisebb a víztartalma, azaz a szántott virágok nagyobb mennyisége nyerhető és a szárítási idő rövidebb), a gépi aratásra jobban alkalmas, mert a virágok messzemenően egy síkban vannak és a virágok túlnyomó többsége egyidejűleg nyílik (ezáltal lehetővé válik az aratási időnek közel optimális meghatározása), a gyógyárú jobb tartóssága (kisebb hajlam a szétesésre és törmelék-képződésre), különösen aromatikus és sajátságos kamillaillat. Az utóbb fölsorolt tulajdonságok például akkor állnak elő, ha a hatóanyag tartalmon kívül kiválasztást végzünk egy vagy több fölsorolt tulajdonság szempontjából is, a kiválasztott növényekből vetőmagvakat nyerünk, az ezeknek elvetése révén létrejövő utódokkal újból kiválasztást végzünk és ezeket a műveletelemeket 3-5-szőr megismételjük. A találmány feladata tehát egy javított tulajdonságokkal, főként az eddigieknék nagyobb (-)-a-biszabolol-tartalommal rendelkező új tetraploid kamilla fajta létrehozása. Kiinduló diploid kamillaként szóba jöhet minden olyan kamilla fajta, amelynek éterikus olajában az (-)-ct-biszabolol jelentős, mérhető koncentrációban van (általában az éterikus olajnak több mint 5%-a). Például olyan diploid kamillák jöhetnek szóba, amelyek a következő irodalmi helyeken vannak ismertetve: Schilcher, H. „Neuere Erkenntnisse bei der Qualintätsbeurteilung von Kamillenöl beziehungsweise Kamillenblüten”, Planta Med. 23, 132-144 (1973); Motl, O., M. Felklová, V. Lukes & M. Jasicová „Zur gaschromatographischen Analyse und zu chemischen Typen von Kamillenöl”, Are. Pharm. 310, 210-215 (1977); Franz, Ch„ J. Hölzl & A. Vomel „Preliminary Morphological and Chemical Characterization of some Populetions and Varieties of Matricaria chamomilla L”, Acta Hort. 73, 109-114 (1978). Ami a diploid egyes növényeket illeti, a kamilla éterikus olaja általában a famezen, spatuleol, kamazulén, a négy biszaboloid egyike, (-)-a-biszabolol, biszabololoxid A, biszabololoxid B vagy biszabolonoxid fő komponensekből áll. A populáció kevert mintájában, valamint tetraploid egyedekben több biszaboloid is lehet egymás mellett. Az éterikus olajban spiroéterek is lehetnek. Különösen alkalmasak azok a diploid kiinduló kamillák, amelyekben az (-)-ct-biszabolol a túlnyomó komponens, azaz az előbb fölsorolt anyagoknak több mint fele. Az előbb fölsorolt anyagok együtt az éterikus olaj 70-80%-át teszik ki. Kiinduló kamillaként főként azok a diploid kamillák jöhetnek szóba, amelyeknél például az (-)-a-biszabolol az éterikus olajnak legalább 40%-a vagy a biszaboloidnak legalább 90%-a. Kiinduló tetraploid kamillaként például szóba jöhetnek a Bodegold kamillafajták (Német Demokratikus Köztársaság), a Pohorelicky (Csehszlovákia), a ZLOTY Lan (Lengyelország), a BK-2 (Magyarország). Ezek a faják a szakirodalomból is ismertek. Egyébként az (-)-a-biszabolol szempontjából, a tartalom szempontjából a tetraploid kiinduló kamilláknál ugyanazok a követelmények és tulajdonságok, mint a diploid kiinduló kamilla fajtáknál. Megemlítjük főként olyan diploid és tertraploid kamilla populációk vehetők figyelembe, amelyek a gyógyáru-keverék mintában általában legalább 100 mg % kamazulént és 50-100 mg % (-)-a-biszabololt tartalmaznak (40 “C hőmérsékleten szárított virágok száraz anyagára vonatkoztatva), azaz diploid kiinduló 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
