201965. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antikoaguláns hatású hirudin-peptidek előállítására
HU 201965 B A tal41mápy tárgya eljárás új, antikoaguláns hatású, hirudin-peptidek előállítására. Az aníikoagulánsok hasznos gyógyászati anyagok például az akut mélyvénás trombózis a tüdőembólia, a végtagok akut artériás embolizálódása, a miokarcfiális infarktus és a szórt intavaszkuláris koaguláció (véredényen belüli vérrögképződés) kezelésében. Úgy tartják, hogy az antikoagulánsok profilaktikus (megelőző jellegű) beadása reumatikus vagy arterioszklerózisos szívbetegségben szenvedő betegeknél meggátolja az embóliák ismételt megjelenését, valamint gátolja bizonyos sebészeti tromboembóüás komplikációk fellépését. Ezen hatóanyagok javallottak továbbá koszorúéri és agy-érrendszeri betegségek kezeléséhez. Az artériás trombózis - különösen a szívizom és a vérellátását biztosító artériákban - a legfőbb halálokok közé tartozik. A hirudin egy 65 tagú polipeptid, melyet piócák nyálmirigyeiből nyernek ki. Trombin-specifxkus inhibitor, koagulálásgátló. Bár a nyálkivonatból izolált hirudin nagyon hatásos, a korlátozott mennyiség, a költségek és a bármely ilyen méretű fehérje beadásával általában együttjáró allergiás reakciók miatt klinikai felhasználásra kevéssé alkalmas. Kísérleteink során azonosítottuk a hirudinnak azt a specifikus részét, mely - legalábbis részben - e peptid koagulálásgátló hatását okozza. Ezt a részt kémiai úton szintetizáltuk, és megállapítottuk, hogy bizonyos analógjai a trombin receptorhelyéhez kötődnek, de nem kötődnek a térben elkülönült enzimes hasítási helyhez. A szintetikus peptidek kötődése kompetitive megakadályozza a fibrinogén kötődését a trombin receptorhelyéhez, ami a fibrintermelés és a vérrögképződés előfeltétele. A találmány szerinti eljárással előállított peptridek jelentős antikoaguláns hatást mutatnak, és az a szokatlan képességük, hogy a trombinnak csak a receptorhelyéhez kötődnek, a hasítási helyhez pedig nem kötődnek, tudományos szempontból érdekes és számottevően hozzájárul az antikoaguláns terápia fejlődéséhez. Tehát a találmány tárgya eljárás (I) általános képletű vegyületek, ahol X jelentése 3-7 szénatomos kétbázisú alkánkarbonsav-maradék, Ai jelentése egy vegyértékkötés, A2 jelentése Tyr, A3 jelentése Glu, A4 jelentése Pro, Pip, Azd, A5 jelentése Ile, Árjelentése Pro, Pip, Azd, Árjelentése Glu, As jelentése Glu, Árjelentése Ala-Cha, A10 jelentése D-Glu, Y jelentése -OH csoport, azzal a kikötéssel, hogy az A4 és Ar nem lehet azonos jelentésű. A leírásiban az aminosavak neveit a következőképpen rövidítettük: Alá- alanin Ile - izqleucin, Cha - ciklphexil-alanin, Pro - prolin, 1 Tyr - tirozin Glu - glutaminsav Pip - L-2-pipekoimsav Azd - L-azetidin-2-karbojdlát A természetben előforduló aminosavak az alanin, izoleucin, tirozin, prolin és a glutaminsav. A „lipofil aminosavak” kifejezésen a következő aminosavakat értjük: Tyr, He és Pro. A természetes aminosavak tartalmaznak egy királis szénatomot. Az itt említett aminosavak, hacsak másként nem jelezzük, L-konfigurációjúak. Az A10 szubsztituens helyén szereplő aminosav D- konfigurációjú. A peptidek szerkezetét szokás szerint úgy írtuk le, hogy a láncvégzáró aminocsoport a lánc baloldalán, a láncvégzáró karboxilcsoport pedig a lánc jobboldalán helyezkedik el. Az (I) általános képletű polipeptidek bármely nem toxikus szerves vagy szervetlen savval reagáltatva gyógyászatiig elfogadható sót képezhetnek. E célra megfelelő szervetlen savak például a sósav, hidrogén-bromid, kénsav, foszforsav és a savas fémsók, mint például a nátrium-monohidrogén-ortofoszfát és a kálium-hidrogén-szulfát. Szerves savként alkalmazhatunk mono-, di- vagy trikarbonsavakat. Ilyenek például az ecetsav, glikolsav, tejsav, piroszőlősav, malonsav, borostyánkősav, glutársav, fumársav, malonsav, borkősav, citromsav, aszkorbinsav, maleinsav, hidroxi-maleinsav, benzoesav, hidroxi-bcnzoesav, fenil-ecetsav, fahéjsav, szalicilsav, 2-fenoxi-benzoesav és szulfonsavak, mint például metán- és 2-hidroxi-etán-szulfonsav. Az aminosav molekularész láncvégzáró karboxilcsoportja bármely alkalmas szervetlen vagy szerves bázissal képezhet nem toxikus karbonsavas sót. Ilyenek például az alkálifémekkel, például nátriummal vagy káliummal, az alkáliföldfémekkel, például kalciummal, vagy magnéziummal, a IIIA csoport könnyűféméivel, például alumíniummal, valamint a szerves primer, szekunder és tercier aminokkal, dibenzilamin, 1-etén-amin, N,N’-dibenzil-etilén-diamin, dihibrabietil-amin, N-(kis szénatomszámú)alkil-piperidin - vagy bármely más alkalmas aminnal képzett sók. Az (I) általános képletű vegyületeket szilárd fázisú szekvenciális - szintézissel állítjuk el. A szilárd fázisú szekvenciális eljárást az ismert automatizált módszerekkel, például automatikus peptidszintetizátorral hajthatjuk végre. Ebben az eljárásban az a-aminosavat egy gyanta jellegű hordozóhoz kötötten alkalmazzuk. Gyanta jellegű hordozóként bármely, a polipeptidek szilárd fázisú előállításához szokásosan alkalmazott gyantát használhatunk. Ez előnyösen 0,5-3% divinil-benzollal térhálósított polisztirol, mely az a-amino-védett aminosav kiindulási anyag észterezési helyeinek biztosítására klór-metilezett vagy hidroxi-metilezett. A hidroxi-metilezett gyanta egyik példáját írják le Bodanszky és munkatársai [Chent. Ind. (London) 38, 1597-98 (1966)]. Egy klór-metilezett gyanta kereskedelmi forgalomban kapható a Bio Rád Laboratories cégnél, Richmond, Caliornia, és egy ilyen gyanta előállításának leírása megtalálható Stewart és munkatársai „Solis Phase Peptides Synthesis” című könyvében (Freeman & Co., San Francisco 1969), Chapter 1, pp. 1-6. A védett aminosavat a Gisin [Helv. Chem. Acta, 56, 1476 (1973)] által leírt 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
