201964. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a T-limfociták érését és a makrofágok aktivitását gátló peptidek és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 201964 B A találmány tárgya a T-limfociták és a makrofágok aktivitását gátló, (1) H-Arg-Lys(Chc)-Asp-Val-OH (2) H-Arg-Lys(Chc)-Asp-OH (3) H-Arg-Sar-Asp-Val-OH (4) H-Arg-Sar-Asp-OH (5) H-Orn-Lys-Asp-Val-OH (6) H-Om-Lys-Asp-OH (7) H-Arg-Lys-Aad-Val-OH (8) H-Arg-Lys-Aad-OH (9) -[H-Arg-Lys-Ap-NH-CH2-]2 H-Arg-Lys-Asp-NH-CH2 (11) [H-Arg-Lys-Asp-Val-NH-CH2-]2 (12) [H-Arg-Lys-Asp-Cys-NH2]2 (13) H-Lys-Ser-Lys-Leu-OH (14) H-Ser-Lys-Leu-OH (15) H-Ser-Ser-Ser-Thr-OH (16) H-Lys-Glu-Thr-OH (17) H-Lys-Thr-Glu-Thr-OH (18) H-Pro-Lys-Leu-Thr-OH (19) H-Lys-Lys-Thr-Glu-OH (20) H-Lys-His-Leu-NH2 képletű új peptidek és savaddiciós sóik, valamint az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására szolgáló eljárás képezi. Egészséges szervezetben az immunrendszer kiegyensúlyozott működése erős védekezési mechanizmust tart fenn, mely képes a behatoló mikroorganizmusokat, idegen anyagokat és daganatsejteket elpusztítani és a szervezetből eltávolítani, miközben a saját egészséges sejtjeit nem károsítja. Ha az immunrendszer csökkent aktivitással (szuboptimálisan) működik, a fertőző idegen vagy rákos sejtek elszaporodhatnak, és ez végső soron a gazdaszervezet működésének teljes felbomlásához vezet. Viszont túlfokozott immunrekciókban nemcsak a behatoló idegen sejtek pusztulnak el, hanem egészséges szövetek is károsodhatnak (azutoimmun és allergiás betegségek). Szervátültetéskor például a szervezet természetes védekezési reakciója a beültetett szövet vagy szerv kilökődéséhez vezet. Az immunválasz megindításában, fenntartásában és felfüggesztésében kulcsszerepet játszanak a timuszeredetű limfociták, az úgynevezett T-sejtck. Ismeretes, hogy az élő szervezetben az immunrendszer működését számos peptid és fehérje befolyásolja információtovábbítás révén. A timuszhormonokat és az immunsejtek által termelt információközvetítő faktorokat (citokineket) széles körben kipróbálták daganatos is immunbetegségek kezelésére [Drugs of the Future, 11, 783. (1986)/; Drugs Exp. Clyn. Res. 13,327 (1987)]. Ezek közé tartozik az úgynevezett timozin 5. frakció, a borjú timusz részben tisztított kivonata, mely az ismert timuszhormonokat tartalmazza [Cancer Immunoi. Immunther., 18,185. (1984)]. Rákos megbetegedések kezelésében kedvező eredményeket kaptak géntechnológiával készült citokinekkel [N. Engl. J. Med. 313,1485. (1985)]. A gyógyszerkészítményekkel szemben egyre szigorúbb minőségi követelményeket támasztanak. Ha a szervkivonatok és bioszintetikus makromole1 kulák nincsenek homogenitásig megtisztítva, a szennyezések nem kívánatos mellékhatásokat okozhatnak. Ez a magyrázata annak, hogy a gyógyászatban mindenütt a pontos szerkezetű és nagy tisztaságú készítmények alkalmazására törekszenek. Az előzőekben említett nagy molekulák immunstimuláló hatását kisebb peptidekkel is sikerült kiváltani (4, 190,646, 4,215,112, 4,232, 008, 4,261,886, 4,395,404 és 4,442,031 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások; 2 938 420,3 001775 és 3 100 974 számú német szövetségi köztársasági szabadalmi leírások, 185 263 és 198 088 számú magyar szabadalmi leírás). A fenti iratokban leírt rövid peptidek megindítják a T- és B-sejtek proliferációját, és általános immunstimuláló hatással rendelkeznek. Ahhoz, hogy a természetes immunszabályozó anyagok teljes hatásspektrumát reprodukálni tudjuk, olyan anyagokra is szükség van, melyek az ismert immunstimulátoroktól eltérő módon az általános immunreakció különböző szakaszaiban fejtik ki hatásukat. Jelen találmány tárgyát képező peptidek általános gátló hatást fejtenek ki az immunrendszer működésére, különösen a T-sejtek érését és a makrofágok aktivitását gátolják. Ez a hatás lehetővé teszi a peptidek alkalmazását az immunrendszer fokozott működésére visszavezethető kórképek kezelésére. A gyógyászatban jelenleg alkalmazott immunszuppresszív gyógyszerek {ciklofoszfamid -[bisz(2- klór-etil)-amino]-tetrahidro-2H-l,3,2-oxazafoszf orin-2-oxid, azatiprin -(l-metil-4-nitro-imidazol-5- il-tio)-purin, kortikoszterodidok, cikloszporin} terápiás indexe tíznél kisebb, azaz a terápiás és mérgező dózis nem tér el jelentősen egymástól, ezért csak szigorú orvosi ellenőrzés mellett alkalmazhatók. Az immunszuppresszív hatású peptidek különös előnyének tekinthető, hogy a szervezetben gyorsan elbomlanak, nem halmozódnak fel a szövetekben és sejtekben, de rövid élettartamuk alatt is képesek elindítani jelentős hatáshoz vezető összetett folyamatokat. Toxicitásuk jellemzően kicsi (LD50 1000 mg/kg i.v.). Az találtuk, hogy az (l)-(20) képletű új peptidek gátolják a T-sej-függő ellenanyag-termelő sejtek érését, csökkentik az ellenanyag-termelő sejtek aktivitását újszülött egerekben, gátolják a fagocitózist, és csökkentik a késői típusú túlérzékenységi reakciót. A peptidek gátló hatásainak az a sajátossága, hgoy az immunfolyamatokban feltehetően gátolják a makrofágok antigén prezentációját és/vagy a T-sejtek antigén felismerését. Tulajdonképpen ezek a folyamatok és kölcsönhatások indítják meg az immunválasz összetett mechanizmusát, így e peptidek immunszuppressziója feltehetően az immunreakció kezdeti szakaszában érvényesül. A találmány szerint az (Il)-(20) képletű új peptideket oldatban, lépésenkénti lánchosszabbítással úgy állítjuk elő, hogy aktív észteres, vegyes anhidrides és/vagy azidos kapcsolási és a- és/vagy e-aminocsoport-felszabadítási lépések egymást követő alkalmazásával hidrogénezéssel vagy savas kezeléssel eltávolítható csoporttal észterezett karboxilcsoportot, adott esetben védett oldalláncbeli hidro-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
