201930. lajstromszámú szabadalom • Eljárás azónia-spironortropanol-észterek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
21 HU 201930 B 22 Koncentrációk. 4 x 10'® g/ml 2 x 10-« g/ml 1 x 10'7 g/ml 5 x 10‘7 g/ml 2,5 x 10-« g/ml 1.25 x IO-® g/ml 6.25 x IO-5 g/rol fürdöedénytartalom fürdőedény tartalom fürdóedénytartalom fürdöedénytartalom fürdóedénytartalom fürdöedénytartalom fürdöedénytartalom 5 Alkalmazott tér- 10 fogat: 0,25 ml Behatás ideje: 5 perc A kővetkező összetételű Ringer-tápoldat: NaCl KC1 NaHCOa CsHl20s X H20 CaCh x H2O :etételu Ringer-tapoldat: 9,000 g E. Merck, Darmstadt 0,210 g E. Merck, Darmstadt 0,500 g E. Merck, Darmstadt 0,500 g E. Merck, Darmstadt 0,318 g E. Merck, Darmstadt A kísérlet végrehajtása 15 A patkányokat a nyakukra mért ütéssel megöljük. A hasüreget a középvonal mentén megnyitjuk, kiveszünk egy körülbelül 10 cm 25 hosszú csipóbéldarabot, azonnal fiziológiásán temperált tápoldatba tesszük és a bél tartalmának eltávolítása céljából 10 ml-es fecskendővel tápoldattal elővigyázatosan kétszer teljesen átőblitjük. Az ezt követő kísérlethez 30 két darab 2 cm-es béldarabot levágunk éB a maradék belet hűtőszekrénybe tesszük. A két béldarabot a tápoldatban a még esetleg hozzátapadó szövettől megtisztítjuk. A bél egyik végére selyemfonalból készített hurkot kő- 35 tünk és ezzel a béldarabot a szervfürdőben rögzítjük, mig a másik végére a regisztráló emeltyűjéhez erősített csipeszhez csatlakozó hosszabb fonalat kötünk. A szervdarabot ezután a tápoldattal töltött és karbogénnel 40 (95% O2 és 5% CO2) átbuborékoltatott fürdőedénybe lógatjuk és 0,5 g súllyal megterheljük. 30 perc nyugalmi fázis után a kísérletet megkezdhetjük. Először megállapítjuk a görcsöt előidéző 45 anyag dózis-hatás összefüggését. A vizsgálandó oldatot egyszeri használatra szolgáló, kanüllel felszerelt tuberkulin-fecskendóvel a fürdófolyadékba injiciáljuk. A fürdötartaloro pontos betartása céljából az injiciált térfo- 50 gatnak megfelelően már előzetesen tápoldatot vettünk ki. Olyan koncentrációkat választunk, amelyek az 5-ös faktor geometriai sorában >10-100% gőrcshatést idéznek elő, emellett a 100%-os hatás olyan határkoncent- 55 rációnak felel meg, amelynek túllépése nem idéz elő nagyobb hatást. A határkoncentrációhoz tartozó értéket vesszük hivatkozási nagyságnak és a kisebb koncentrációkhoz tartozó hatásokat számítás útján erre a 60 100%-os értékre vonatkoztatjuk. Az egyik béldarabon teljes koncentráció-hatásgörbét mérünk ki. A górcsőt előidéző anyag behatási ideje a szervre 5 perc, ezután a fürdóedény tartalmát háromszor öblítve kicseréljük, majd (anyag hozzáadása nélkül) 30 perc nyugalmi fázist iktatunk be. A görcsöt előidéző anyag koncentráció-' -hatás összefüggésének meghatározása után megállapítjuk a vizsgálandó vegyület antagonists hatóerejét. Ehhez a vizsgálandó vegyületet 3 perccel a görcsöt előidéző anyag beadása előtt konstans koncentrációban a fürdőedény tartalmához injiciáljuk. A kísérlet ezt követő végrehajtása megfelel a mér leírtaknak: a görcsöt előidéző anyagot növekvő koncentrációban beadjuk, háromszor öblítünk, 30 perc nyugalmi fázist tartunk. A vizsgálandó vegyület koncentrációit a hatástól függően változtatjuk, emellett minden koncentrációra 10 kísérletet végzünk. Analízisek és készülékek A kísérleti berendezés vízszintesen rögzitett, körülbelül 66 cm hosszú, henger alakú üvegköpenyből áll, a végein be- és kivezető csapokkal, amelybe két előmelegítő Bpirál van forrasztva, ezek kívülről csatlakozó csonkokkal vannak ellátva, és ezek egy-egy, alul csappal elzárható 25 ml térfogatú fürdőedénybe torkollnak. Az üvegköpenyen keresztül ultratermosztátból {.Colors' cég) szívatással 34 °C-ra felmelegitett, ásványi anyagoktól mentesített vizet cirkuláltatunk, úgy, hogy az előmelegítő spirálokban és a fürdóedényekben lévő tápoldat állandóan egyenletesen legyen melegítve. A tápoldatot szükség esetén egy magasabban álló üvegből csőrendszeren vezetjük az előmelegítő spirálokba. A fürdöedények fenekén a tápoldat karbogénnel (95% O2 és 5% CO2) történő folyamatos átbuborékoltatása céljából gázkezelésre szolgáló csövek vannak elhelyezve, amelyek számára, az alsó harmadban üvegkampók vannak forrasztva, ezekre akasztjuk az előkészített béldarabok egyik végét, mig a másik végét a hosszú fonallal a regisztráláshoz (MP-Beschriftung) fém regisztráló emeltyűjéhez kötjük. Végül az emeltyűn a súlyt beállítjuk és az emeltyű homlok-regisztrálóját egy kiraográf regisztráló dobjának (200 mm 0) MP-papírjára helyezzük. Az MP-papirt a kísérlet alatt egy asztali csúszóállvány a dobra feltekeri. A papír továbbítási sebessége 2,62 mm x perc"1. A regisztrálás szélessége beépitett potenciométerrel ellátott MP-gene rá torral szabályozható. A jobb áramfolyás céljából az MP-papirra egy érintkező görgőt szerelünk, amely az MP-generátor földelő hüvelyével van összekötve. Az MP-papiron regisztráltakat a kísérlet befejezése után speciális rögzitósprével fixáljuk. A regisztráláshoz szükséges valamennyi berendezés a Braun cég, Melsungen gyártmánya. 13
