201913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piridinszármazékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
3 HU 201 913 B 4 (COMT-gátló) hatással rendelkeznek. Ezen tulajdonság meglétét 0,1 mg/kg vagy ennél magasabb dózis intraperitoneális alkalmazása után in vivo tudtuk kimutatni, melynek során háromféle tesztrendszert alkalmaztunk, mimellctt a COMT gátlását in vivo patkányok corpus striatumában levő homovanillinsav szintjének csökkenésével, illetve patkányok corpus striatumában a monoaminooxidáz-bénítók alkalmazása utáni 3-metoxi-triamin-akkumuláció gátlásával tudtuk igazolni. Ezeken túlmenően narkotizált patkányokon végzett „Einzelzellableitung”-teszt során, kb. 3 mg/kg vagy ennél magasabb dózis alkalmazása esetén, a locus coeruleus sejtek „firing”-jének növekedését figyeltük meg. A kísérletek ismertetése Homovanillinsav (HVA) meghatározása patkányok corpus striatumában Patkányok agyából kipreparáljuk a striatumokat és ezeket -20 'C-ra történő mélyhűtés közben tároljuk a vizsgálat lefolytatásáig. A striatumokat kettesével 2 ml mobil fázisban homogenizáljuk, ami az alábbiakban leírt nagynyomású folyadékkromatográfiás (HPLC) elválasztáshoz szükséges. Ez a mobil fázis extraktumonként 1000 nanogramm vanillinsavat tartalmaz és ez tölti be a belső standard szerepét. A sejttörmelékeket centrifugálással elválasztjuk, és a felülúszóból 50- 200 plitert beinjektálunk egy BAS folyadékkromatográfiás rendszerbe (Bioanalytical Systems, W. Lafayette, Ind., USA), amely még a következő berendezésekkel is fel van szerelve: Clg pBondapak fordított fázisú oszlop (Waters Ass., Milford, USA), TL3 elektrokémiai detektorcella és egy LC4 jelű ellenőrző rendszer. Az említett detektorcella cpw grafitpasztát tartalmaz és annak potenciálját egy ezüst/ezüst-klorid referenciaelektródához képest + 0,85 V értékre állítjuk be. A mobil fázis 0,1 mól/liter citromsavat, 0,075 mól/litcr dinátrium-hidrogén-foszfátot, 2,5% tetrahidrofuránt és 0,05 mól/liter nátrium-oktil-szulfátot tartalmaz és annak pH-ját sósavval 3 értékűre állítjuk be. Az optimális elválasztás érdekében az oszlop hőmérsékletét 28- 40 "C között tartjuk, 1-1,3 ml/perc átfolyási sebesség mellett. Csoportonként öl kísérleti állatot alkalmazunk. A 3-metoxi-tiramin (3-MF) feldúsulásának meghatározása clorgylinnel végzett MAO-gátlás után A kísérleti állatok patkányok. Ezeknek előbb orálisan agy intraperitoneálisan beadjuk a vi/.sgálm kívánt vegyületet, majd 5 perc múlva s/ubkulán 10 mg/kg clorgylint adunk be az állatoknak és 30 perccel később az állatokat elpusztítjuk. Az állatok leölését mikrohullámú besugárzással végezzük, ennek energiája: 10 kW (áramtcljcsítmény), frekvenciája: 24 50 MHz (megahertz) és az időtartama: 1,7-1,8 máwxlporc (Pucschner Mikrowellen - Energietechnik, Schu .me wcde/Bremen, Német Szövetségi Köztársaság). Miután az állatok kihűltek, kipreparáljuk a striatumokat e> azokat 2 ml alábbi összetételű elegyben homogenizáljuk: 0,1 mól/liter citromsav, 0,075 mó/litei dmálrium-hidrogén-foszfát, 2,5% tetrahidrofurán és O.ns millimól/liter nátrium-oktil-szulfát, sósavval pH=3 értekre beállítva. Az elegy belső standardként még 1000 nanogramm vanillinsavat is tartalmaz. A sejttörmclékcket ccntrifugálással elválasztjuk, és a felülúszóból 50-200 (Bitért beinjektálunk egy BAS folyadékkromatográfiás rendszerbe (Bioanalytical Systems, W. Lafayette, Ind., USA), amely még a következő berendezésekkel is fel van szerelve: C,8 pBondapak fordított fázisú oszlop (Waters Ass., Milford, USA), egy 5100A Coulometer- Detektor (Model ESA), valamint egy dctckiorcclla (Model 5010, ESA Inc., Bedford, Mass., USA). A 2. detektor potenciálja: + 0,45 V, míg az 1. detektor ki van kapcsolva. A mobil fázis egy citrát-foszfát-puffer. Ezt úgy készítjük, hogy 0,1 mólos citromsavat és 0,1 mólos dinátrium-hidrogén-foszfátot pH = 3 értéken összekeverünk és ehhez meg 10% etanolt, valamint 1,55 millimól/liter nátrium-oktil-szulfátot adunk hozzá. Az átszivattyúzás sebessége: 1,3 ml/perc. A COMT gátlása következtében a neuronokbán képződött és idegizgalom folytán felszabaduló catecholaminok (mint pl. a dopamin) metabolikus lebontása is gátolt lesz, így ezen aminok koncentrációja megnövekszik a szinaptikus részben. Ezáltal például a depressziós jelenségeket és a parkinzonizmust kiváltó okot, mint például a dopamin hiányát, messzemenően meg lehet szüntetni. A találmány szerinti vegyületek alkalmazása során a neuronokbán végbemenő COMT-gátlással egyidejűleg még a mctilczéshez szükséges S-adenzoil-metionin feldúsulása is bekövetkezik. Az S-adenozil-metionin koncentrációjának növekedése feltételezhetően fokozza a tanulási képességet - a jelenlegi felfogás szerint. A fentieknek megfelelően az (I) általános képletű vegyületeket, illetve ezek megfelelő tautomerjeit, továbbá mindezeknek gyógyszerészeti szempontból alkalmas sóit például gyógyszerek - így nootropikumok, antidepresszívumok, valamint Parkinson-kór ellenes szerek - hatóanyagaként hasznosíthatjuk. A találmány további tárgya ezen találmány szerinti vegyületek alkalmazása gyógyszerkészítmények, különösen nootropikumok, antidepresszívumok (depresszióellenes szerek) és Parkinson-kór elleni szerek előállításához, valamint ezek terápiás vagy profilaktikus célokra történő felhasználása. A találmány a hatóanyagok ipari mértékben történő előállítását is magába foglalja. A találmány főleg az olyan (I) általános képletű vegyületek és tautomerjeik, továbbá mindezek sói előállítására vonatkozik, ahol Rí hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, R2 és R3 közül az egyik hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, fenil-(l-4 szénatomos)alkil- vagy naftil- vagy (1-4 szénatomos)alkilcsoport, míg a másik 1-6 szénatomos alkilcsoportot, fenil-(l-4 szénatomosjalkil- vagy naftil-(l—4 szénatomos)alkil-csoportot jelent és R, hidrogénatom vagy 1-5 szénatomos alkilcsoport, míg Rs jelentése hidrogénatom vagy (1-4 szénatomos)alkil-csoport. A találmány különösen az olyan (I) általános képletű vegyületek és tautomerjeik, továbbá mindezek sói előállítására vonatkozik, ahol R, hidrogénatom vagy \-á szénatomos alkilcsoport, R2 és R3 közül az egyik hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, fenil-(l—4 szénatomos)-alkil- vagy naftil-(l-4 szénatomos)alkil-csoport, míg a másik 1-6 szénatomos alkilcsoportot, fenil-(1-4 szénatomos)alkil- vagy naftil-(l—4 szénatomos)alkil-csoportot jelent, és R4 és R5 hidrogénatom. A találmány mindenekelőtt az olyan (I) általános képletű vegyületek és tautomerjeik, továbbá mindezek sói előállítására vonatkozik, ahol R, hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, így metilcsoport, R2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
