201874. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, biológiailag aktív hatóanyag, és ezt az anyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 201874 B 2 Kísérlet száma Injektált anyag Injektált térfogat Kezdeti vérnyomás Legalacso nyabb vérnyomás Idő (perc) max. válaszig Hematokrit érték Kezdeti Végső 3. nyers ciszta-folyadék 25-szörös koncentrátuma (K3) 2,0 ml-ben oldva 1,0 ml 115-120 75-80 20 50 28 4 ** ciszta-folyadék 100-szoros koncentrátuma (K3B) 0,2 ml 105 60 30 48 28 1 ml-ben oldva *: GFR 0,18 ml/perc-től (kontroll peridóus) 0,28 ml/perc-ig emelkedik az adagolás után **: Végső plazma-értékek: Na+ 141 mmól/1; K+ 5,4 mmól/1 A kísérleti eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze. 20 Minden egyes kísérletben, mikor a kísérleti állatnak a találmány szerinti eljárással előállított biológiailag aktív anyagot adagoljuk, jelentős csökkentést tapasztalunk a vérnyomásban, amely az 1. kísérletben meg- 25 fordíthatatlan (mivel a kísérleti állat elpusztul), míg a 2. és 3. kísérletben részlegesen visszafordítható. A 3. kísérletben a vérnyomás csökkenése 15 percen belül eléri a maximális értéket; ezt követően a vérnyomás egy 20-40 perces periódus alatt fokozatosan 30 visszatér az alap vérnyomás-értékre. A hematokrit-értékben következetes csökkenés észlelhető, a négy kísérleti állatnál a végső hematokritérték a kiindulási értékek 51, 69, 57 és 58%-a. A hematokrit-érték csökkenésének oka ismeretlen. Azon- 35 ban ha sejtszámlálást végzünk, a sejtek tényleges számában nem tapasztalható csökkenés (a hematokrit-érték nem a sejtek számán, hanem azok térfogatán alapul). Az 1. állatban - az egyetlen olyan állatban, amely- 40 ben sikerült meghatározni a glomeruláris fíltrációt (GFR-t) az egyetlen vese-érték a biológiailag aktív anyag beinjektálása előtt 0,18 ml/perc. Ez az érték a biológiailag aktív anyag beadása után 0,32, illetve 0,24 ml/perc-re növekedik a két begyűjtött vizeletmintában. A plazma nátrium- és kálium-koncentrációja a 4. kísérlet befejezése után - amelyben az állatot a legjobban tisztított anyaggal kezeltük - 141, és 5,4 mmól/1, ami normál értéknek felel meg. Ezt követően, az 1. példa 4. lépése szerinti utolsó extraktumként nyert, legtisztább frakciót is beadtunk egy állatnak. A vizsgálatot az 1. táblázatban összefoglalt kísérletekkel azonos módon végeztük. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. A kísérletben a 4. lépésben kapott, legtisztább frakciót vizsgáljuk. A biológiailag aktív anyag beadagolása a vérnyomás gyors csökkenését eredményezi, amint azt a kevésbé tiszta minták esetén is tapasztaltuk. Ha ugyanannak az állatnak egy újabb dózist adunk a biológiailag aktív anyagból (2. táblázat, 5’. kísérlet) - ami 160 pg digoxin-ekvivalansnek felel meg - a vémoymás újabb csökkenését figyelhetjük meg. A fenti kísérleti erdményekből látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított biológiailag aktív anyag azonnali csökkenést eredményez a vérnyomás-értékekben. Ezekből a kísérletekből látható, hogy a találmány szerinti eljárással előállított biológiailag aktív anyag vérnyomáscsökkentő szerek hatóanyagként is alkalmazható. 2. táblázat Kísérlet Injektált anyag Injektált Kezdeti Legalacso-Idő Hematokrit-érték száma térfogat vérnyomás nyabb vér nyomás (perc) a max. válaszig Kezdeti Végső 5 70 pg 0,010 ml 140 120 25 n.d.* n.d. 5’ 160 pg 0,025 ml 120 60 15 n.d. n.d. *: nem vizsgáltuk 4. példa Az emlöciszta-folyadékból izolált biológiailag aktív anyag viselkedése gluzalázzal végzett kezelés után Az 1. példa szerint előállított K3B frakció egy részét gluzalázzal - egy, a Helix pomatia csigából származó extraktummal (Endo Laboratories, Garden City, NY, USA) kezeljük, amely szulfatáz és glükuronidáz elegyét tartalmazza. Míg az enzimes kezelés előtt a mintákat nem lehet vízből etil-acetáttal extrahálni, az enzimes 60 emésztés után etil-acetáttal extrahálható a biológiailag aktív anyag vízből. Eszerint a minták szulfátokat és/vagy glükuronsavat tartalmazó szteroid-konjugátumok tulajdonságaival rendelkeznek. A gluzalázzal emésztett mintákat Spehasorb HP-n 65 ujrakromatografáljuk, a fentiek szerint, azzal az el-7
