201808. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gén amplifikáció mértékének és/vagy nukleinsav molekulák számának meghatározására és reagens készlet az eljárás megvalósítására
HU 201808 B befogó szondái a c-myc gén 1,1 kilobázis hosszúságú Xbal-PstI fragmensét tartalmazó olyan rekombináns fágok, amelyekben az említett fragmens az M13 mplO és M13 mpll fágvektorokba az Xbal és PstI restrikciós enzimekre jellemző hasító helyek közé szubklónozottan van jelen, és a standard szondapár a 6. igénypont szerinti. 9. Az 1. igénypont szerinti eljárás a dihidrofolátreduktáz vagy DHFR gén amplifikációja mértékének és/vagy az ennek a génnek megfelelő hírvivő RNS molekulák számának meghatározására, azzal jellemezve, hogy a b) lépésben alkalmazott tesztszodapár detektor szondája egy, a pMTVdhfr plazmid DHFR génjét kódoló, 0,75 kilobázis hosszúságú HindlII-BglII fragmenst tartalmazó olyan rekombináns plazmid, amelyben az említett fragmens a pAT153 plazmid vektorba a HindlU és BamHI restrikciós enzimekre jellemző hasító helyek közé szubklónozottan van jelen, és befogó szondái a pMTVdhfr plazmid MMTV gén szakaszában 1,4 kilobázis hosszúságú HindlII fragmensét tartalmazó olyan rekombináns fágok, amelyekben az említett fragmens az M13 mpl8 és M13 mpl9 fágvektorba a HindlII restrikciós enzimre jellemző hasító helyen szubklónozottan van jelen, és a standard szondapár a 7. igénypont szerinti. 10. Reagens készlet gén amplifikáció mértékének és/vagy nukleinsav molekulák számának meghatározáshoz, azzal jellemezve, hogy a készlet legalább egy teszt-szondapárt és legalább egy standard szondapárt tartalmaz, és mind a teszt-, mind a standard szondapár detektor szondája alkalmas jelzéssel van jelölve a befogó szondák pedig vagy alkalmas hordozón vannak rögzítve, vagy egy olyan anyag van a befogó szondákhoz kötve, amely a szendvics hibridek izolálását lehetővé teszi. 11. A 10. igénypont szerinti reagens készlet a c-myc onkogén amplifikációja mértékének és/vagy az ennek a génnek megfelelő hírvivő RNS molekulák számának meghatározásához, azzal jellemezve, hogy alkalmazott teszt-szondapár detektor szondája egy olyan rekombináns plazmid a c-myc gén 3,7 kilobázis hosszúságú HindlII-Xbal restrikciós fragmensét a pBR322 plazmidba a HindlII restrikciós enzim hasítási helyén szubklónozva tartalmazza; befogó szondái olyan rekombináns fágok, amelyek a c-myc gén 1,1 kilobázis hosszúságú Xbal-PstI fragmensét az M13 mplO és M13 mpll fág vektorokba az Xbal és PstI restrikciós enzimek hasítási 15 helyei közé szubklónozva tartalmazzák; a standard szondapár detektor-szondája a humán c-Ki-rasI gén HindlII fragmensének 1,1 kilobázis hosszúságú BglII-BglIII fragmense, ahol is a HindlII fragmens a pBR322 plazmidba klónozottan, a BglII-BglII fragmens pedig a pBR322 plazmidba a BamHI restrikciós enzimre jellemző hasítóhelyen szubklónozva van jelen; és a befogó szondák a c-Ki-rasI gén HindlII fragmensének 0,5 kilobázis hosszúságú BglII-HindlII fragmensét tartalmazó olyan rekombináns fágok, amelyekben a HindlII fragmens a c-Ki-rasI gén pBR322 plazmidjába szubklónozotta, a BglH-Hindlll fragmense pedig az M13 mplO és M13 mpll fág vektorokba a BamHI és Hindin resktrikciós enzimekre jellemző specifikus hasítóhelyek közé szubklónozottan van jelen. 12. A 10. igénypont szerinti reagens készlet a dihidrofolát-reduktáz vagy DHFR gén amplifikációja mértékének és/vagy az ennek a génnek megfelelő hírvivő RNS molekulák számának meghatározásához, azzal jellemezve, hogy az alkalmazott tesztszondapár detektor szondája egy olyan rekombináns plazmid, amely a pMTVdhfr plazmid DHFR génjét kódoló 0,75 kilobázis hosszúságú HindlIIBglII fragmenst a pAT153 plazmid vektorba a Hindin és BamHI restrikciós enzimekre jellemző hasítási helyek közé szubklónozva tartalmazza; befogó szondái a pMTVdhfr plazmid MMTV génszakaszának 1,4 kilobázis hosszúságú HindlII fragmensét tartalmazó olyan rekombináns fágok, amelyekben a HindlII fragmens az M13 mpl8 és M13 mpl9 fág vektorokba a HindlII restrikciós enzimre specifikus hasító helyen szubklónozva van jelen; a standard szondapár detektor szondája egy olyan rekombináns plazmid, amely az egér metalloptionin gén promoter részének 5’-vége felé (upstram) eső 1,2 kilobázis hosszúságú EcoRI-KpnI fragmenst a pAT153 plazmidba az EcoRI és HindlII restrikciós enzimekre jellemző specifikus hasító helyek közé szubklónozottan tartalmazza; és befogó szondái a metallotionin gén promoter szakaszából és az attól az 5’-vég felé (upstream) eső szakaszból kiadódó 0,8 kilobázis hosszúságú Kpnl-BglII fragmenst tartalmazó olyan rekombináns fágok, amelyekben a Kpnl-BglII fragmens az M13 mpl8 és M13 mpl9 fág vektorokba a KpnI és BamHI restrikciós enzimekre jellemző hasítóhelyek közé szubklónozottan van jelen. 16 5 10 15 20 25 30 35 40 45 9
