201805. lajstromszámú szabadalom • Eljárás UK-6 1689 antibiotikum mikrobiológiai uton történő előállítására valamint a hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 201805 B tánban kristályosítjuk fehár szilárd anyagként kinyerve az UK-58852 antibiotikumot. 2. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, de az FD-28454 (ATCC 53 674) törzs helyett FD-28499 (ATCC 53 664) törzset használunk. A HPLC vizsgálatok tanúsága szerint a teljes fermentlé metilizobutil-ketonos extraktuma UK61689 antibiotikumot tartalmaz, és lényegében nem tartalmaz UK- 58852 antibiotikumot (1% alatt). A vékonyrétegkromatográfiás viselkedése azonos az 1. példában leírtakkal. Az UK-61689-et úgy hozzuk savformába, hogy a nátriumsójának kloroformos oldatát azonos térfogatú foszforsavas vízzel kevertetjük, melynek kémhatása pH=3,0. A fázisokat elválasztjuk, és a kloroformos fázist csökkentett nyomáson bepároljuk UK-61689 antibiotikumot nyerve szabad sav formájában. A érmék spektrum adatai megegyeznek az 1. példában megadottakkal. 3. példa Az FD-28474 (ATCC 53 665) törzzsel végzett fermentációt az 1. példában leírtak szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy a táptalaj nem tartalmaz kukoricalekvárt és vérlisztet. Négy fermentáció teljes fermentlevét egyesítjük és szűrjük. A szűrletet és a kiszűrt micéliumot külön-külön extraháljuk metil-izobutil-ketonnal (3x200 ml). Az extraktumokat egyesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. 18,5 g olajos maradékot kapunk. A maradékot 200 ml acetonban felvesszük, az oldatot két egyenlő részre osztjuk (I és II oldat). Az I oldat kémhatását 20%-os nátrium-hidroxid oldattal pH=12 értékre állítjuk be. A lúgos oldatot szűrjük és olajos maradékig pároljuk csökkentett nyomáson. Az olajhoz 10 ml acetont, 79 ml heptánt és 39 ml vizet adunk, sötétbarna kristályok válnak ki. A kristályokat heptánban eldörzsövel 2 g halványbarna kristályos anyaghoz jutunk, mely a 13 HPLC vizsgálat szerint 15% UK-61689 és 5% UK- 58852 antibiotikumot tartalmaz. AII oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, az olajos maradékot 100 ml etil-acetátban oldjuk. Az oldatot 500 g szilikagélből készült oszlopon kromatografáljuk eluensként etil-acetátot alkalmazva. Az UK-61689 antibiotikumot tartalmazó frakciókat egyesítjük és olajos maradékig bepároljuk. A maradékot 10 ml acetonból és 110 ml heptánból álló elegyben vesszük fel, a nyert UK-61689 kristályokat szűréssel összegyűjtjük és szárítjuk. 1,2 g antibiotikumhoz jutunk. Az UK-58582 antibiotikumot nem nyertük ki. A termék fizikai állandói megegyeznek az 1. példában megadottakkal. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) képletű UK-61689 jelű vegyület előállítására, azzal jellemezve, hogy asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajban, süllyesztett aerob körülmények között Actinomadura roseorufa ATCC 53 665, ATCc 53 674, ATCC 53666 vagy ATCC 53 664 törzset tenyésztünk, majd kívánt esetben az (I) képletű vegyületet a fermentléből kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az UK-61689 jelű vegyületet kinyeijük a fermentléből. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Actinomadura roseorufa ATCC 53 665 vagy ATCC 53 674 törzseket tenyésztünk. 4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Actinomadura roseorufa ATCC 53 664 törzset tenyésztünk. 5. Eljárás antikokcidiális készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított (I) képletű UK-61689 vegyületet - kívánt esetben szokásos segédanyagokkal összekeverve - antikokcidiális készítménnyé alakítjuk. 14 5 10 15 20 25 30 35 40 8
